碱性蛋白酶是一种重要的蛋白水解酶,在食品、洗衣、皮革等领域中都有广泛的应用。本文对实验室筛选并鉴定为洛菲不动杆菌的菌株所产碱性蛋白酶进行了分离纯化,利用生物学软件对其氨基酸序列进行了一系列分析,研究了该碱性蛋白酶水解大豆分离蛋白的最佳条件。经过硫酸铵沉淀、透析、CM Sepharose Fast Flow阳离子交换层析和Sephacryl S-200凝胶过滤层析,得一大小约为35 KD的碱性蛋白酶。该酶的比活力由开始的568.46 U/mg提高到了1494.79 U/mg,纯化倍数为2.63倍,酶活力回收率为27.16%。对碱性蛋白酶进行了序列测定并利用生物学软件对碱性蛋白酶氨基酸序列进行了分析:可知该碱性蛋白酶含有氨基酸残基248个,是一种非分泌型蛋白。该碱性蛋白酶亲水性区域占比较大,属于亲水性蛋白质。该蛋白是以α螺旋1次跨膜。其二级结构为:α螺旋42.34%,β链16.13%,β转角9.68%,无规则卷曲31.85%,分析碱了该碱性蛋白酶的结合位点,进行了空间构象的建模。将碱性蛋白酶运用于水解大豆分离蛋白,考察了最佳水解条件。选取水解时间、温度、底物浓度、pH值和加酶量5个因素进行单因素分析,进而运用响应面(RMS)优化法对温度、pH值、底物浓度三种因素进行了优化。得到最佳水解条件为:水解时间2 h,酶量6000 U/g,43.99℃,底物浓度3.85%,pH 8.93,优化后的水解度达14.41%。