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机体的抗肿瘤免疫反应主要是由激活的T淋巴细胞介导,T淋巴细胞激活需要两个信号系统,第一信号是由T细胞受体(TCR)与抗原肽-MHC复合物相结合所提供的,第二信号是由辅助分子或共刺激分子通过与T细胞上相应受体结合而传递的,其中以B7分子的共刺激作用最为重要。肿瘤细胞表面往往缺乏或低表达B7分子,是肿瘤细胞逃避宿主免疫系统监视的机制之一。趋化因子可通过趋化免疫活性细胞到达肿瘤部位,还可抑制肿瘤血管生成,产生抗肿瘤效应。本研究通过逆转录病毒载体介导共转染趋化因子MIP-1α基因和共刺激因子B7-1基因,期望通过“招引-活化”的机制,即将免疫细胞聚集到肿瘤局部,并给予激活,达到更强的抗肿瘤效应,为乳腺癌免疫基因治疗提供新的途径。我们在成功构建的B7-1和MIP-1α基因基础上,应用基因重组技术将MIP-1α和B7-1分别导入带不同选择标记的两种逆转录病毒载体pLXSN和pBabe puro,通过基因转染和克隆筛选等技术,得到了两株分泌不同重组逆转录病毒的包装细胞。通过病毒上清感染、药物筛选等技术得到了MIP-lα和B7-1双基因修饰的大鼠乳腺癌细胞株SHZ-88/mMIP-1α+mB7-1。计数板法绘制细胞生长曲线显示重组逆转录病毒感染对乳腺癌细胞增殖无明显影响。RT-PCR和流式细胞仪分别证实SHZ-88/mMIP-1α+mB7-1有B7-1 mRNA和蛋白水平的表达;RT-PCR、免疫细胞化学分别显示SHZ-88/mMIP-1α+mB7-1有MIP-1αmRNA和蛋白水平的表达。体外趋化实验证实MIP-lα基因修饰的乳腺癌细胞能分泌具有趋化活性的分子;MTT比色法证实B7-1基因修饰大鼠乳腺癌细胞能刺激大鼠脾单个核细胞增殖。动物体内实验表明, MIP-lα和B7-1双基因共修饰乳腺癌细胞的致瘤性消失,能抑制野生型肿瘤细胞的体内生长及延长荷瘤大鼠的生存期,均优于单基因组或对照组(P<0.05)。流式细胞仪及ELISA结果显示MIP-lα和B7-1双基因共修饰乳腺癌细胞接种后,外周血CD4+和CD8+细胞的百分比、CD4+/CD8+比值及IL-2、IFN-γ含量均较单基因组或对照组升高(P<0.05)。HE染色结果显示:SHZ-88/mMIP-1α+mB7-1细胞于肿瘤中心接种后,瘤组织可见大量的淋巴细胞浸润。SHZ-88细胞肿瘤中心注射后只见少量淋巴细胞浸润。肿瘤注射部位对肿瘤体积、CD4+和CD8+细胞的百分比、CD4+/CD8+比值及外周血IL-2、IFN-γ的含量无明显影响(P>0.05)。本研究得到如下结论:1.通过逆转录病毒载体能介导建立MIP-1α和B7-1基因共表达的大鼠乳腺癌细胞株,具有招引单个核细胞,并将其激活的体外生物学活性。2.共转染MIP-1α和B7-1比MIP-1α或B7-1基因单独转染,能产生更强的抗肿瘤作用,不仅使肿瘤细胞自身不能在动物体内接种成瘤,而且能明显抑制野生型细胞的体内生长及延长荷瘤大鼠的生存期。