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植物个体在没有明显逆境、机械和农药损伤或病原物侵害时,在叶片上能自发形成病斑,这种病斑与病原物侵染后产生的病斑非常类似。人们将这类病斑表型的突变体称为类病斑突变体(lesion mimic mutant)。研究这类突变体对了解植物细胞发育与凋亡的相关基因以及植物抗病抗逆防卫基因信号途径等方面起到重要作用。本研究利用经60Coγ射线辐射处理粳稻品种嘉花1号获得的一个水稻类病斑突变体lms1(lesion mimic stripe1)为材料,对其突变体的形态性状、遗传特征进行初步研究以及分子定位,主要结论如下:
⑴该lms1突变体在苗期第1片叶未展开之前就出现棕黄色斑,随着第1片叶展开,其斑块也随之扩大并转为黄白色条斑,且斑块内部会出现坏死病斑。斑块主要位于叶片上部和中部,一般每张叶片有2~3个斑块。斑块除了在叶片上生成,植株茎秆上也会出现,并且一直伴随植株生长。大田种植的该突变体成熟植株较正常野生型成熟植株矮小,易早衰,结实率低。农艺性状调查结果分析表明,lms1突变体的株高,穗长,穗数和千粒重都比野生型有所下降。
⑵lms1突变体表型受温度的影响。突变体lms1在30℃温度条件下叶片表现出白色条斑块,在20.0℃温度下叶片表现出白色条斑块和棕褐色坏死斑块,表明低温条件能促进该突变体病斑的表现。
⑶在电子显微镜下对lms1突变体幼苗白色条纹斑部分进行观察,发现突变型叶片白斑部分的叶绿体形状异常,类囊体片层呈不规则状,类囊体垛叠不成形,基粒类囊体和基质类囊体之间连续性较差。这些观察结果表明突变可能影响了叶绿体的发育。
⑷对lms1突变体的光合色素含量测定表明,突变体的叶绿素含量明显低于野生型。台盼蓝染色实验结果表明,lms1突变体叶片类病斑的形成和发展可能是一个细胞程序性死亡的过程。DAB染色实验结果表明,突变体lms1有大量的H2O2沉积斑点产生,lms1类病斑表达能引起水稻细胞产生过敏性反应的活性氧迸发。
⑸遗传分析表明,lms1突变体性状受一对隐性核基因控制。采用粳稻lms1突变体与籼稻9311杂交产生的F2代群体作为初定位群体,通过图位克隆法,先将该突变基因lms1定位在水稻第6号染色体的短臂端粒附近。然后采用粳稻lms1突变体与培矮64S杂交产生的F2代群体作为精细定位群体,并发展新的分子标记,将该突变基因定位在400kb的区域内,通过生物信息学比对分析,初步推断lms1基因可能是一个至今尚未报道过的新基因。