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骨质疏松是以骨量降低、骨组织显微结构改变和骨折的危险性增加为特征的一类疾病。其发病率高,危险性大,目前已与动脉硬化、高血压病、糖尿病、肿瘤等并列为老年人的重要疾病。西医主要来用雌激素、钙剂、降钙素等治疗。虽有一定疗效,但有较大的副作用。因此,探讨用中医药防治本病,有较大的临床意义。 姜良铎教授根据多年临床经验用三仙汤(淫羊藿、仙茅、仙鹤草),治疗更年期综合症等疾病,改善妇女绝经期的症状疗效显著。前期实验表明三仙汤有促进成骨细胞增殖作用。因此,设想通过采用建立动物模型与体外细胞培养相结合的实验研究方法,筛选防治骨质疏松症的疗效确切的中药复方,为临床应用提供实验依据,并探讨中医药防治骨质疏松症的作用机理。具体实验内容为: 一 方法 1.体外培养成骨细胞株UMR106观察三仙汤在不同浓度对成骨细胞增殖和对成骨细胞上清液、裂解液中碱性磷酸酶的影响。 2.雌性SD大鼠3月龄59只,制作去卵巢大鼠所致骨质疏松症模型,随机分为假手术组、模型组、阳性组、三仙小剂量组、三仙中剂量组、三仙大剂量组共六组。假手术组及模型组用生理盐水灌胃,日一次,阳性组,每周灌胃尼尔雌醇一次,三仙汤小剂量组用5.98g/kg剂量,三仙汤中剂量组用11.96g/kg剂量,三仙汤大剂量组用23.92g/kg剂量,每日灌胃一次。共持续十二周。处死后,测定大鼠血清中钙、磷、碱性磷酸酶及尿钙、尿磷及骨密度等指标。 二 结果: 1.三仙汤在1mg/L、5mg/L、10mg/L、100mg/L、250mg/L、500mg/L、1000mg/L7个不同浓度均能促进成骨细胞增殖。其中10mg/L组较100mg/L、250mg/L、500mg/L、1000mg/L4组促增殖作用更强,有显著性差异。三仙汤浓度在1-10mg/L之间时对成骨细胞的增殖作用呈上升趋势。成骨细胞裂解液测定,发现浓度为1mg/L,10mg/L时碱性磷酸酶活性较空白组碱性磷酸酶活性稍增高。细胞上清液中浓度为1mg/L时碱性磷酸酶活性较空白组碱性磷酸酶活性稍增高。 2.三仙汤对去卵巢大鼠骨质疏松模型的影响:模型组,血清中钙、磷较假手术组明显降低(P<0.01或P<0.05),尿钙较假手术组值明显升高(P<0.05),尿磷较假手术组有所增高(P>0.05),血清碱性磷酸酶浓度较假手术组升高中文摘要3 (P>0.05),大鼠骨密度删渊手术组显著哪(P<0.01或P<0.05),说明 造模成功。各治疗组情况为:与模型组比较,三仙小剂量、中剂量、大剂量、 阳性组血钙、血磷浓度均较模型组有显著上升 (<0.of或 P<0.05* 三仙小剂量 组、中剂量组、大剂量、阳性组朋均较模型组有所下降(P> 05*其中以三 仙小剂量组下降最明显。三仙小剂量组、中剂量组、大剂量组脚均瓣型组 明显下降(P北.01或P刃.05),其中以三仙小剂量组下降最明显。三仙汤小剂 量、中剂量、大剂量组均较模型组和假手术组ALP水平均明显上升P<队05厂 三仙汤小剂量、中剂量、大剂量、阳性组骨密度鞭型组明显上升 P刃.01),其中三仙汤中剂量组骨密度(聊)相对较高与阳性组相近.三讨论: 1.W比色分析法测定细栅殖率,自1983年hos。un首创以来,已成为免疫学衡量细胞增殖的经典方法,能准确、灵敏地反映药物对成骨细胞存活和增殖的影响,进而反映药物对骨形成能力的影响。三仙汤在1呕/L、SM几、1峋/L、nm呕/L、25吨/L、5m吧/L、100hag几 7个不同浓度均能促进成骨细胞增殖,10 g几促进成骨细胞增殖最强。碱性磷酸酶(AIJP)是成骨细胞的标记酶,细胞漱液浓度为ig/L、lhag几时成骨细胞中ALP活性都较空白组有所上升,细胞上清液中浓度为峋 时ALP上清液含量较空白组有所上升。 2.骨是人体中钙、磷的最艄库。通脓骨与溶骨作用,不断与细胞外液进行钙磷交换、对维持血钙和血磷稳定有重要作用。钙磷是骨骼的重要组成成分;实验表明三仙汤能升高去卵巢大鼠血钙、血磷、血清碱性磷酸酶水平,提高骨密度,脓尿钙、尿磷浓度。四结论: 1三仙汤有促进成骨细胞增殖的良狮用,并在低剂量时瓣更好;同时低剂量时能提高细胞内ALP活性,增强成骨细胞功能。 2三仙汤能升高去卵巢大鼠血钙、血磷、血清碱性磷酸酶水平,提高骨密度,氏尿钙、尿磷浓度,具有明显的剩钙、剩磷、增强去卵巢大鼠的成骨细胞活性的作用,促进骨质形成,在骨代谢和骨转换中起到了积极的综排用,且有优于尼尔雌醇的趋势。其中三仙小剂量组在升高血钙、血磷、血清碱性磷酸酶,降低尿钙、尿磷方面作用较显著。三仙汤中剂量组在提高去卵巢大鼠的骨密度方面作用较显著。