【摘 要】
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目的获得分泌特异性抗H1N1亚型(A/California/04/2009)猪流感病毒单克隆抗体(mAb)的杂交瘤细胞并对其分泌抗体的功能进行探索。方法以表达血凝素蛋白H1(A/California/04/2009
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目的获得分泌特异性抗H1N1亚型(A/California/04/2009)猪流感病毒单克隆抗体(mAb)的杂交瘤细胞并对其分泌抗体的功能进行探索。方法以表达血凝素蛋白H1(A/California/04/2009)的DNA疫苗为免疫原,免疫6~8周龄雌性BALB/c小鼠,取其脾细胞与NS1骨髓瘤细胞进行细胞融合,通过间接ELISA方法筛选分泌抗H1N1亚型(A/California/04/2009)抗体的杂交瘤细胞,再通过亚克隆筛选单一、稳定分泌其抗体的细胞株。结果获得能稳定分泌抗流感病毒血凝素H1亚型的单克隆抗体杂交瘤4株,分别命名为41H2,68E5,41E7和26D11。其中68E5,41E7和26D11为IgG1(K);41H2为IgG2a(K)。运用lenti-pseudovirus方法测试显示26D11可识别结构性位点,具有H1N1(A/California/04/2009)专一性较强的中和能力,是中和性抗体。Western blotting检测显示41H2和41E7为阳性,识别线性位点。特异性实验表明26D11、41H2和41E7只与H1(A/California/04/2009)亚型流感病毒发生特异性反应,而不与其它15个HA亚型的流感病毒发生交叉反应,显示出良好的特异性。结论用单克隆抗体杂交瘤技术成功制备了甲型H1N1流感病毒的单克隆抗体,结合相关多克隆抗体,我们还研发了检测新型2009 H1N1HA抗原的ELISA试剂盒。
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