【摘 要】
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含有4段鸟嘌呤重复序列(G-tract)的DNA能够折叠成G-四链体结构(G-quadruplex)。目前为止,人们对DNA双链在转录过程中形成的G-四链体结构及其功能还不是很清楚。最近的研究表明
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含有4段鸟嘌呤重复序列(G-tract)的DNA能够折叠成G-四链体结构(G-quadruplex)。目前为止,人们对DNA双链在转录过程中形成的G-四链体结构及其功能还不是很清楚。最近的研究表明,转录过程中产生的RNA可以参与G-四链体结构的形成,由非模板链上的G-tract以及RNA产物上的G-tract混合组成一个杂合G-四链体结构(Hybrid G-quadruplex,HQ)。在非模板链上仅需2段G-tract便可以经过转录而形成一个杂合G-四链体结构,能够形成这种杂合G-四链体结构的序列在基因组中的分布可能最为广泛。然而,这种杂合G-四链体结构在体内条件下能否形成及其影响还有待进一步研究。另一个值得研究的问题是转录过程中杂合G-四链体结构是如何与纯合G-四链体结构竞争的。构建了一个含有T7启动子的质粒,在该质粒的下游插入了1至6段串联的G-tract。在体外用T7 RNA聚合酶对这些质粒进行转录后,我们用小分子光切割的方法发现了2段G-tract和3段G-tract样品中形成了G-四链体结构,由于它们不能形成纯合的DNA G-四链体结构,推测它们形成了一种杂合的G-四链体结构,这种结构的形成需要RNA的参与;我们接着用内切酶消化的实验进一步证明了上述的结论,然后检测到杂合G-四链体结构中RNA的存在。通过对7-deaza-GTP和GTP转录的RNA产物分析,发现G-四链体结构会导致转录的终止,并且进一步发现,在4至6段G-tract的样品中,尽管它们能够形成纯合的G-四链体的结构,我们的实验结果证明它们仍然形成了杂合的G-四链体结构,并且是杂合的G-四链体结构导致转录的终止。我们然后将这些质粒转化至能够表达内源T7RNA聚合酶的大肠杆菌中,通过对转录产物的分析,发现转录过程中结构形成的规律以及其作用与体外的结果完全一致。这些发现首次证实了体内杂合G-四链体结构的形成并揭示了G-四链体结构对转录产生的影响。
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