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研究背景三氯乙烯(TCE)是一种有机溶剂,在工业上作为脱脂、清洗和去污剂应用广泛。TCE职业暴露的工人出现三氯乙烯药疹样皮炎(DMLT)已经成为国内主要的职业卫生问题之一,有关TCE引起危害的案例时有报道,靶器官主要是肝脏、肾脏、神经、皮肤等。目前国内外相关研究主要在皮肤和肝脏等领域,对TCE导致肾脏损伤的研究较少,机制仍然不明。研究目的根据不同组别以及时点豚鼠肾脏中MDA含量和SOD活力以及尿液中ALB、α1-MG、β2-MG、γ-GGT和AAP含量的变化,结合肾功能和病理学检查,探讨TCE对肾脏的损伤作用。研究方法选用体重250～300g/只,白色雌性豚鼠,经适应性饲养一周后,随机分成空白对照组、溶剂对照组(橄榄油)、TCE暴露组和2,4-二硝基氯苯(DNCB)对照组。采用豚鼠最大值试验(Guinea Pig Maximization Test, GPMT)方法建立豚鼠致敏模型,观察并记录豚鼠背部皮肤反应情况并进行拍照;依据《化学品毒性鉴定技术规范》(卫监督发【2005】272号)中规定的皮肤反应评分标准对豚鼠皮肤反应进行评分;当动物皮肤反应积分≥1时,为皮肤致敏反应阳性,该动物被划分为致敏组,反之被划分为未致敏组。分别在末次激发前一天和末次激发后24h、72h分三批收集豚鼠24小时尿液,采用ELISA方法测定尿蛋白及尿酶等相关指标,抽取豚鼠血液制备血清,用于测肾功能;处死动物,无菌取肾脏,用甲醛及戊二醛固定,分别用于HE染色及透射电子显微镜观察病理;组织匀浆后测定MDA和SOD变化。用SPSS15.0统计软件包对实验结果进行统计分析。结果1.致敏率在皮肤致敏反应试验中,空白组、溶剂对照组及TCE14d组未见红斑或水肿,在TCE试验组的26只动物中有17只出现红斑水肿,致敏率为65.38%,DNCB实验组全部出现红斑或水肿。2.病理学检查结果HE染色和超微病理结果显示,TCE致敏组肾小球毛细血管基底膜节段增厚或者菲薄,足突部分融合,肾小管上皮细胞线粒体肿胀、空泡变性,微绒毛萎缩,个别小管呈萎缩状。3.肾功能检查结果溶剂对照组肾功能各指标与空白组相比,差异无统计学意义(p>0.05);与溶剂对照组及TCE14d组相比,TCE致敏组两个时点血清BUN水平均明显升高(P<0.05);TCE致敏组血清BUN水平均较非致敏组高(P<0.05);与相应时点DNCB对照组相比,TCE致敏72h组升高(P<0.05)。与溶剂对照组相比,TCE致敏组两个时点血清Cr水平有升高趋势,但差异无统计学意义(P>0.05);TCE致敏24h组高于未致敏24h组;与相应时点的DNCB相比,TCE致敏组血清Cr水平均较高(P<0.05)。4. mALB检测结果溶剂对照组与空白组相比差异无统计学意义(p>0.05);与溶剂对照组相比,TCE14d组、TCE致敏组及未致敏组豚鼠24小时尿液中mALB含量均明显升高(p<0.05);与TCE14d组和TCE未致敏组相比,TCE致敏组尿液中mALB含量均明显升高(p<0.05);与相应时点的DNCB对照组相比,TCE致敏组和未致敏组mALB含量均明显升高(p<0.05)。5.α1-MG检测结果溶剂对照组与空白组相比差异无统计学意义(p>0.05);与溶剂对照组相比, TCE致敏组、未致敏组各时点均明显升高,且差异有统计学意义(p<0.05);与TCE14d组相比,TCE致敏组和未致敏组豚鼠尿液中α1-MG含量均明显升高(p<0.05);与TCE未致敏组相比,TCE致敏72h组豚鼠尿液中α1-MG含量明显升高(p<0.05);与相应时点的DNCB对照组相比,TCE致敏组豚鼠24小时尿液中α1-MG含量明显升高(p<0.05)。6.β2-MG检测结果溶剂对照组与空白组相比差异无统计学意义(p>0.05);与溶剂对照组相比,TCE致敏组各时点均明显升高(p<0.05);与TCE14d组相比,TCE致敏组尿液中β2-MG含量均明显升高(p<0.05);与TCE未致敏组相比,TCE致敏24h组豚鼠尿液中β2-MG含量明显升高(p<0.05);与相应时点的DNCB对照组相比,TCE致敏组豚鼠尿液中β2-MG含量明显升高(p<0.05)。7. AAP检测结果溶剂对照组与空白组相比差异无统计学意义(p>0.05);与溶剂对照组相比,TCE致敏组各时点均明显升高(p<0.05);与TCE14d组相比,TCE致敏组24h尿液中AAP活性明显升高(p<0.05);与TCE未致敏组相比,TCE致敏组豚鼠尿液中AAP活性均明显升高(p<0.05);与相应时点的DNCB对照组相比,TCE致敏组豚鼠尿液中AAP活性均明显升高(p<0.05)。8. Y-GGT检测结果溶剂对照组与空白组相比差异无统计学意义(p>0.05);与溶剂对照组相比,TCE14d组、TCE致敏组各时点均明显升高(p<0.05);与TCE未致敏组相比,TCE致敏24h、72h组豚鼠尿液中γ-GGT活性稍高,但差异无统计学意义(p>0.05);与相应时点的DNCB对照组相比,TCE致敏组豚鼠尿液中γ-GGT活性均明显升高(p<0.05)。9. MDA和SOD检测结果溶剂对照组与空白组相比差异无统计学意义(p>0.05);与溶剂对照组相比,TCE致敏24h组MDA含量明显上升(P<0.05);TCE致敏组与未致敏组比较,24h组MDA含量差异有统计学意义(P<0.05)。TCE致敏组SOD活性比溶剂对照组明显降低(P<0.05);TCE致敏24h、72h组SOD活性较非致敏组低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论1、采用豚鼠最大值试验可以建立TCE致敏模型,本实验条件下,TCE致敏率为65.38%。2、TCE暴露可造成豚鼠肾脏的病理性和功能性损伤;TCE对豚鼠肾脏的损害不局限于肾小球,还累及肾小管,且对肾小管的损害程度重于肾小球。3、尿蛋白和尿酶可能作为影响因素和氧化应激一起在TCE致敏豚鼠肾脏损伤中发挥重要作用。4、TCE对肾脏的作用机制不同于DNCB,TCE不单纯是致敏剂,也是免疫损伤剂。