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白细胞介素2(Interleukin-2,IL-2)主要是由T细胞和NK细胞等产生一种的糖蛋白,在免疫细胞的成熟、活化、增殖和免疫调节等一系列过程中均发挥着重要的作用。鸡IL-2(ChIL-2) mRNA全长747bp,阅读框cDNA 429bp,编码142个氨基酸残基,N端含有22个氨基酸残基的信号肽序列。本文为探讨ChIL-2全基因和去除信号肽的基因序列在原核和真核表达系统中的表达行为,分别构建含有信号肽序列和不含信号肽序列的原核和酵母表达载体,并在大肠杆菌和酵母中进行表达,以期为IL-2基因在不同表达系统中的高效表达和表达调控的研究奠定基础。根据GenBank中发表的ChIL-2基因cDNA序列设计三条引物,利用RT-PCR技术从经诱导的卢氏鸡胚脾淋巴细胞中扩增出429bp的ChIL-2基因全长编码区cDNA和363bp的成熟的ChIL-2的cDNA,分别将两段cDNA克隆到原核表达载体pET28a(+)和酵母表达载体pPICZαA中,获得原核重组质粒pET28a-IL-2、pET28a-△SIL-2和酵母重组质粒pPICZαA-IL-2、pPICZαA-△SIL-2。SDS-PAGE和Western blotting分析鉴定表达产物,RNA Structure软件分析mRNA5′端的二级结构。pET28a-IL-2、pET28a-△SIL-2转化的BL21(DE3)菌在IPTG浓度为1.0mmoL/L、诱导4h表达水平最高,表达出的22kD和18kD蛋白经Western blotting鉴定为鸡IL-2和△SIL-2。在相同条件下,IL-2的表达水平明显低于△SIL-2,经RNA Structure软件分析发现,在IL-2 mRNA的5′端形成了比较复杂的二级结构,“茎环”比为1.034,而△SIL-2 mRNA的5′端的“茎环”比仅为0.571。推测可能是由于IL-2 mRNA5′端复杂的二级结构阻碍了mRNA与核糖体30S亚基的结合,从而影响了翻译的起始效率的缘故。pPICZαA-IL-2和pPICZαA-△SIL-2转化的巴斯德毕赤酵母X-33在30℃、甲醇浓度为1%、诱导72h和96h表达明显,表达出28kD和24kD的融合蛋白经Wester-blotting鉴定为鸡IL-2和△SIL-2。在相同条件下,IL-2的表达水平略低于△SIL-2,经RNA Structure软件分析发现,前者的mRNA也形成了比较复杂的二级结构,“茎环”比为1,而后者的mRNA的“茎环”比为0.4706。推测mRNA复杂的二级结构也可能是影响酵母表达水平的原因之一。