论文部分内容阅读
目的:1、观察慢性睡眠剥夺对小鼠海马组织转运蛋白(Translocator Protein,TSPO)蛋白和基因表达情况及TSPO与胶质细胞共表达情况。2、进一步观察慢性睡眠剥夺对小鼠海马组织NLRP3炎性小体及其下游炎症因子蛋白和基因表达水平影响。3、探究TSPO配体依替福辛(Etifoxine,ETX)对慢性睡眠剥夺后小鼠海马组织NLRP3炎性小体及其下游促炎因子蛋白和基因表达影响。通过探讨慢性睡眠剥夺后TSPO表达与炎症反应的关系及其配体对NLRP3炎性小体作用,进一步为慢性失眠活体成像、神经炎症反应的在体监测提供可能思路,并为慢性失眠伴焦虑抑郁患者综合治疗提供新的方法。方法:C57BL/6J小鼠,成年7-9周,随机分为4组,每组12只:正常对照组(cage control,CC):适宜环境下饲养1周;慢性睡眠剥夺组(REM sleep deprivation,SD):适宜环境下饲养1周,利用改良多平台水环境法(Modified multiple platforms method,MMPM)进行睡眠剥夺7d;慢性睡眠剥夺+etifoxine组(SD+ETX):正常环境下饲养1周,利用MMPM进行睡眠剥夺7d,睡眠剥夺结束后6h腹腔注射TSPO配体etifoxine(50mg/kg),持续3d后处死;慢性睡眠剥夺+Vehicle组(SD+Vehicle):正常环境下饲养1周,利用MMPM进行睡眠剥夺7d,睡眠剥夺结束后6h腹腔注射等体积载体溶液,持续3d后处死。采用免疫荧光染色法观察CC组及SD组小鼠海马组织TSPO阳性细胞数目,并观察TSPO与胶质细胞共表达情况;采用Western-blot检测小鼠海马组织TSPO、NLRP3、Caspase-1、IL-1β蛋白表达水平;采用RT-PCR检测四组小鼠海马组织NLRP3、IL-6、IL-1β、IL-18、TNF-αmRNA水平变化。结果:1、与CC组相比,SD组小鼠海马组织TSPO阳性细胞数目增多,TSPO蛋白表达水平增加,TSPOmRNA表达水平升高,差异具有统计学意义(分别为P<0.01、P<0.001、P<0.01)。2、免疫荧光双标发现小鼠海马组织胶质细胞存在TSPO表达,慢性睡眠剥夺7d后小鼠海马组织胶质细胞TSPO表达增加,以小胶质细胞增多为主;差异具有统计学意义(均为P<0.01)。3、与CC组相比,SD组小鼠海马组织NLRP3、Caspase-1、IL-1β蛋白水平升高,差异具有统计学意义(均为P<0.01);海马组织NLRP3及促炎因子IL-6、IL-1β、IL-18、TNF-αmRNA表达水平增加,差异具有统计学意义(分别为P=0.015、P<0.01、P=0.028、P=0.017、P<0.01)。4、与SD相比,SD+Vehicle组小鼠海马组织NLRP3、Caspase-1、IL-1β蛋白表达水平及炎性因子IL-6、IL-1β、IL-18、TNF-αmRNA表达水平无明显变化,差异无统计学意义。5、与SD相比,SD+ETX组小鼠海马组织NLRP3、Caspase-1、IL-1β蛋白水平减少,差异具有统计学意义(分别为P=0.031,P=0.029,P<0.01);海马组织NLRP3及炎性因子IL-6、IL-1β、IL-18、TNF-αmRNA表达水平下降,差异具有统计学意义(分别为P=0.023、P=0.035、P=0.023、P=0.044、P=0.049)。结论:1、TSPO主要表达在海马小胶质细胞和星形胶质细胞上;慢性睡眠剥夺后小鼠海马组织TSPO基因及蛋白表达增加,胶质细胞活化,TSPO阳性细胞增多,提示TSPO的表达可能与慢性睡眠剥夺后胶质细胞炎症反应密切相关,并为慢性失眠活体成像、神经炎症反应的在体监测提供可能思路。2、慢性睡眠剥夺促进小鼠海马组织NLRP3炎性小体及其下游炎症因子的表达,这可能是慢性失眠对机体产生炎性损伤作用机制之一。3、TSPO配体可抑制NLRP3炎性小体表达,表明TSPO可能参与慢性睡眠剥夺后NLRP3炎症小体活化的调控。未来TSPO配体可能是慢性失眠患者诊断与治疗的一种新选择。4、Etifoxine作为一种非苯二氮卓类抗焦虑药物,可能在改善焦虑躯体症状同时减轻慢性失眠患者炎症损伤,这为慢性失眠伴焦虑患者的临床综合治疗提供理论依据。