甘薯糖蛋白的分离纯化及其糖链结构鉴定

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本文以北京2号甘薯(Ipomoea Batatas LAM)为原料,利用现代分离纯化技术、仪器分析鉴定技术对甘薯糖蛋白的分离纯化、理化性质及其糖链结构进行了系统的研究。主要获得了如下研究结果: (1)利用现代分离纯化技术从北京2号甘薯中分离纯化得到甘薯糖蛋白4个级分SPG-1、SPG-2、SPG-3、SPG-4,得率分别为:1.23,0.03,0.14,0.05%(以甘薯干基计)。经Sepharose CL-6B柱层析、ConA-Sepharose亲和层析和HPLC法鉴定,均为单一峰。甘薯糖蛋白4个级分SPG-1、SPG-2、SPG-3、SPG-4,用Sephadex G-100柱层析测定,其分子量分别为:49.97,28.36,10.68,8.25×104;经HPLC测定,其分子量分别为:50.83,29.06,11.19,8.60×104。甘薯糖蛋白4个级分为不含淀粉、还原糖、多酚类,而含蛋白质的中性糖类复合物。甘薯糖蛋白4个级分SPG-1、SPG-2、SPG-3、SPG-4中总糖含量分别为:97.32,92.54,76.65,99.14%;蛋白质含量分别为:2.15,6.83,22.36,0.43%。甘薯糖蛋白的SPG-1、SPG-2、SPG-3、SPG-4均为含O-型糖肽键的糖蛋白。 (2)利用β-消除反应释放和现代分离纯化技术从SPG-1中得到糖链SPG-1-P,经Sepharose CL-6B柱层析和毛细管电泳鉴定,为单一对称峰。用Sephadex G-100柱层析测定,分子量为40.67×104;用高效液相色谱(HPLC)法测定,其分子量为39.24×104。 (3)利用化学方法和仪器分析鉴定技术,得到SPG-1-P的一级结构可能如下: →(-α-D-6Gclp1-)n→ SPG-1-P的高级结构为:SPG-1-P主要由C6H12O6晶体组成,并含有一定量的非晶体成分。晶型为单斜晶型,每个晶胞由8个葡萄糖分子组成,其晶胞参数为a=0.664nm,b=1.2nm,c=1.97nm;SPG-1-P在常温中性水溶液中有明显的正科顿吸收(Cotton Effect)。 本论文首次利用甘薯为原料,应用现代生物活性物质的分离提取纯化技术成功地从甘薯中获得甘薯糖蛋白纯品,并对其颜色反应、分子量、纯度、糖肽键特征、总糖和蛋白质含量以及氨基酸组成等理化性质进行了系统的研究。采用β-消除反应和活性多糖的纯化技术,成功地将糖链从甘薯糖蛋白中释放出来并获得了其纯品,并对其纯度和分子量进行了测定。采用完全酸水解,完全甲基化,Smith降解,气相色谱、红外光谱、气质联谱、核磁共振谱等方法研究了甘薯糖蛋白糖链的一级结构,首次提出了其化学结构中重复单元可能的连接方式,并采用X-射线纤维衍射和圆二色谱等探索其高级结构。
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