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目的:观察CVVHDF治疗MODS犬的生命体征、外周血单核细胞功能、器官功能的影响和对器官组织病理损害的影响;探讨并揭示MODS病变过程中内质网应激反应相关凋亡信号转导异常表达的分子机制,及CVVHDF减轻机体细胞凋亡的作用机制;通过血浆磷脂代谢分析发现和判别MODS过程中和给予CVVHDF治疗时血浆生物标记物的差异,进一步探讨CVVHDF治疗MODS犬过程中对血浆磷脂代谢的影响,为MODS的诊断及治疗提供新的思路。方法:（1）选取Beagle犬作为研究对象,通过“二次打击”的方法建立MODS犬模型;随机分为CVVHDF组和MODS组,两个组相应的给予CVVHDF治疗24h和不给予任何治疗作为实验对照,设定建模开始时为T1时间点,MODS犬建模成功时为T2时间点,分别设定CVVHDF治疗后的6h、12h和24h时为T3、T4和T5,监测两组实验动物在T1T5时间点的生命体征（体温、血压、心率）、器官功能（肝功能、肺功能和肾功能）、外周血单核细胞功能（抗原的呈递、分泌功能和凋亡）的变化情况;（2）在T5时间点处死两组的实验犬,留取肝脏、肺脏和肾脏的组织样本,在组织水平上使用HE染色法和TUNEL法观察各个脏器的组织病理学改变和组织细胞凋亡的差异。（3）体内实验部分:选取MODS组和CVVHDF组的肝脏、肺脏和肾脏组织样本,通过实时荧光定量PCR（Quantitative Real Time PCR,qRT-PCR）检测上述组织中JNK、CHOP和Caspase-12的mRNA表达量差异。（4）体外实验部分:体外分别针对JNK、CHOP和Caspase-12三个基因位点各设计四条不同的干扰序列,完成Human JNK、Human CHOP和Human Caspase-12 shRNA慢病毒载体的构建;用构建的慢病毒表达载体和包装质粒共转染293T细胞完成病毒的包装,收集病毒原液并测定滴度;体外培养人脐静脉内皮细胞（Human Umbilical Vein Endothelial Cell,HUVEC）,用慢病毒的阴性对照和包装好的慢病毒感染HUVEC,感染成功后通过Western Blot和qRT-PCR方法评价干扰载体对靶基因的干扰效果并得到稳定株,给予饥饿处理后构建内质网应激凋亡模型;使用两组在T1T5各时间点的血清对内质网应激凋亡模型的培养及诱导,并使用Western Blot、qRT-PCR检测目的基因的mRNA和蛋白和的表达,使用流式细胞术检测HUVEC的凋亡水平。（5）采用超高效液相-四级杆-飞行时间串联质谱（UPLC/Q-TOF MS）联用技术,建立稳定的血浆磷脂反相色谱和质谱分离条件,采用ESI+和ESI-两种离子模式,建立了全面、快速分析血浆中磷脂成分的分析方法,并采用主成分分析（PCA）和偏最小二乘判别分析（PLS-DA）对数据进行处理和分析比较,对MODS组和CVVHDF组血浆中的磷脂成分进行快速定性分析研究,最终确定CVVHDF治疗MODS犬过程中对血浆磷脂代谢的影响。结果:（1）MODS模型建立成功后实验犬均出现不同程度的体温升高、心率加速和血压降低,MODS组的上述指标在T3T5时间点与T1时间点相比具有显著性差异（P<0.05）,CVVHDF组的上述指标随治疗时间延长均有不同程度好转,且在T3T5时间点与MODS组相比均具有显著性差异（P<0.05）。所有MODS犬模型的心功能、肝功能、肺功能和肾功能均有不同程度的损伤;CVVHDF组的实验犬在经由CVVHDF治疗后与成模时（T2）相比均有不同程度好转,且在T3T5时间点与MODS组相比具有显著性差异（P<0.05）。MODS组中的外周血单核细胞的抗原呈递和分泌功能均有明显受损,早期和晚期凋亡水平明显升高;与MODS组相比CVVHDF组中单核细胞的抗原呈递和分泌功能得到明显改善,早期和晚期凋亡水平明显降低,且在T3T5时间点相比均有显著性差异（P<0.05）。（2）在组织水平上,MODS组的肝脏、肺脏和肾脏均出现明显的病理学损伤,CVVHDF组的损害程度与MODS组相比明显减轻;与MODS组相比,CVVHDF组实验犬肝脏、肺脏和肾脏组织细胞的凋亡指数明显降低。（3）体内实验部分:使用qRT--PCR方法检测两组实验犬肝脏、肺脏和肾脏中JNK、CHOP和Caspase-12的mRNA表达水平,结果显示CVVHDF组中,肝脏、肺脏和肾脏组织中上述三个基因的mRNA表达水平普遍低于MODS组,差异有统计学意义（P<0.05）。（4）体外实验部分:分别将JNK、CHOP、Caspase-12构建的4个shRNA干扰载体进行测序,经过比对发现重组克隆中插入片段序列与设计的oligo序列完全一致,认为JNK-shRNA、CHOP-shRNA、Caspase-12-shRNA慢病毒载体构建成功;分别将JNK、CHOP、Caspase-12构建好的4个shRNA慢病毒载体进行慢病毒滴度测定,结果显示所有构建好的慢病毒载体滴度均大于108,提示慢病毒滴度质量合格;分别将JNK-shRNA、CHOP-shRNA和Caspase-12-RNA转染HUVEC进行验证,验证结果发现所有慢病毒均成功感染HUVEC,经由Western Blot和qRT-PCR进行沉默效果检测发现在所有转染成功的shRNA中JNK-shRNA4、CHOP-shRNA1和Caspase-12-shRNA1的沉默效果最好,故选用上述3个shRNA感染后的靶细胞成功构建稳定株。通过使用Western Blot和qRT-PCR的方法检测发现在shRNA干扰前CVVHDF组JNK、CHOP和Caspase-12的mRNA、蛋白和HUVEC凋亡水平均随造模时间的延长而降低,组间比较显示CVVHDF组上述指标水平均显著低于MODS组,差异在T2T5时间点均具有显著性差异,提示CVVHDF治疗可减轻由“二次打击”所造成的凋亡效应,机制可能与降低体内JNK、CHOP和Caspase-12基因的表达有关;进一步的,在经shRNA慢病毒特异性沉默JNK、CHOP和Caspase-12基因后,MODS组和CVVHDF组上述基因的mRNA、蛋白与HUVEC的凋亡水平与干扰前相比均有显著降低,且在T1T5时间点差异均有统计学差异,提示CVVHDF治疗可通过抑制JNK、CHOP和Caspase-12的表达而降低HUVEC的凋亡水平。（5）经UPLC/Q-TOF MS检测,并通过PCA和PLS-DA进行数据处理后发现在MODS模型建立以后（T2）,溶血磷脂酰胆碱（LPCs）、鸟氨酸、脯氨酸、蛋氨酸等水平呈现下降趋势,肉碱、游离脂肪酸（FFA）、磷脂酰胆碱（PC）、溶血磷脂酰乙醇胺（LPEs）和胆汁酸的水平升高;MODS组内T4时间点与T2时间点相比较发现正磷酸、苯基丙氨酸、苏氨酸、酪氨酸、肉碱、亮氨酸和LPE水平升高,同时硫酸对甲酚、脯氨酸、柠檬酸、游离脂肪酸、神经髓鞘磷脂（SMs）等水平出现下降;CVVHDF组内T4与T2时间点相比发现蛋氨酸、脯氨酸、精氨酸和赖氨酸的水平出现回升,同时肉碱、SMs和正磷酸水平发生下降;另外,在T4时间点,CVVHDF组中的柠檬酸、胆碱、LPCs、LPEs、MAGs、马尿酸和对甲酚硫酸盐等代谢物水平较MODS组水平高,而肉毒碱和PC38:4的水平出现显著下降。结论:CVVHDF治疗可显著改善MODS犬生命体征的紊乱,纠正主要脏器功能和组织病理学的损害,同时可提升外周血单核细胞抗原呈递、分泌功能和减轻凋亡效应。CVVHDF治疗后可降低由内质网应激所导致的JNK、CHOP和Caspase-12基因及其蛋白的表达水平,减弱组织细胞凋亡,抑制MODS的损伤作用。MODS状态下血浆磷脂代谢发生异常分布,CVVHDF治疗可改善这种磷脂代谢的紊乱,并通过调控多种脂代谢和氨基酸代谢过程维持机体的代谢平衡。