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背景:DDP是我国目前常用的一种化疗药物,对于多种恶性肿瘤具有明显疗效,但同时又伴有严重的毒副作用,其中以肾毒性最为明显,严重影响了DDP的疗效和临床应用。DDP诱发肾毒性的机制可能与氧自由基的堆积,凋亡因子的激活有关。目前减轻DDP肾毒方法是采用水化疗法,但该疗法易引发患者体内电解质紊乱,故仍存争议。芸香苷具有降低毛细血管通透性、抗炎、抗过敏、抗菌、抗病毒、抑制醛糖还原酶等活性。本实验选择HMCs作为研究对象,探究芸香苷对DDP诱发肾毒性的保护作用及其相关机制。目的:通过检测SOD、MDA、p53、pro-caspase-9、pro-caspase-3、cleavedcaspase-3、Bax及Bcl-2在HMCs中的表达情况,研究芸香苷对DDP肾毒性的保护作用,并对其作用机制进行初步探讨。方法:将细胞分为5组,即正常组(CON组)、模型组(MOD组)、芸香苷50μM组(RUT 50μM组),芸香苷25μM组(RUT 25μM组)、芸香苷12.5μM组(RUT 12.5μM组)。应用MTT、荧光染色、活性氧探针、流式细胞术、及Western Blotting等方法检测HMCs的凋亡率、形态变化、活性氧含量以及SOD、MDA、p53、pro-caspase-9、pro-caspase-3、cleaved-caspase-3、Bax及Bcl-2在细胞中的表达情况。结果:1.MTT结果显示,细胞培养24h后,DDP可以显著降低细胞存活率,不同浓度芸香苷均能提高细胞存活率;2.细胞形态学结果显示,给药24h后,MOD组死细胞增多,细胞发生分散、破碎;芸香苷各剂量组与MOD组相比,死细胞减少,细胞形态明显改善;3.流式细胞仪检测结果显示,给药24h后,MOD组细胞出现明显的周期阻滞,凋亡细胞数增多;与MOD组相比,芸香苷25μM、12.5μM剂量组细胞周期阻滞得到改善,凋亡细胞数减少;4.活性氧含量及SOD、MDA检测结果显示,给药24h后,MOD组细胞内活性氧含量增加,SOD活力降低,MDA含量升高;芸香苷各剂量组与MOD组相比,细胞内活性氧含量降低,SOD活力升高,MDA含量降低;5.Western Blotting结果显示,MOD组细胞p53、cleaved-caspase-3蛋白表达水平显著提高,而pro-caspase-9、pro-caspase-3及Bcl-2/Bax蛋白水平明显降低;与MOD组相比,芸香苷各剂量组可降低细胞内p53、cleaved-caspase-3蛋白表达,上调pro-caspase-9、pro-caspase-3及Bcl-2/Bax蛋白表达,尤以25μM组效果最佳。结论:1.芸香苷能够提高HMCs细胞存活率、改善细胞形态和周期阻滞,并可降低细胞内ROS和MDA的含量,提高SOD活力,说明芸香苷对DDP诱发HMCs毒性具有保护作用;2.芸香苷可显著降低凋亡细胞数,其可能机制是通过抑制细胞内p53、cleaved-caspase-3蛋白表达,上调pro-caspase-9、pro-caspase-3及Bcl-2/Bax蛋白表达来实现的,由此推断芸香苷可通过抑制p53/caspase信号通路中相关凋亡因子的表达实现其对肾脏的保护作用。