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目的:肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(Tumor Necrosis Factor- related apoptosis inducing ligand,TRAIL)是肿瘤坏死因子(Tumor Necrosis Factor,TNF)超家族的新成员。实验已经证实TRAIL对来源于几乎所有系统恶性肿瘤的大部分细胞系均有杀伤作用,而对正常细胞并无杀伤作用,这一特性有可能使其成为新型的抗肿瘤药物。丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinases, MAPKs)是细胞内的一类丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶。研究证实, MAPKs信号转导通路存在于大多数细胞内,它将细胞外刺激信号转导至细胞及其核内,并引起细胞增殖、分化、转化及凋亡等细胞生物学反应,MAPKs在这过程中具有至关重要的作用。其中p38MAPK信号途径是MAPKs家族中的重要组成部分,经外界刺激而激活,引起细胞内蛋白激酶的连锁反应,作用于细胞周期的各个检验点,参与调控细胞的增殖、凋亡和分化。基质细胞衍生因子1(SDF-1;又称CXCL12)是趋化因子CXC亚家族的一员,最初作为B细胞生长因子由基质细胞克隆而来。后来证实,非成熟的成骨细胞、骨髓内皮细胞以及许多器官(如神经系统)的上皮细胞持续分泌SDF-1,CXCR4是目前己知SDF-1唯一的受体,广泛的表达在血液,免疫和中枢神经系统细胞上,功能性CXCR4表达在MM细胞上,SDF-1与CXCR4相互作用,通过调节MM细胞依赖VLA-4和LFA-1的粘附作用决定MM细胞的运动和定居在骨髓微环境。此前我们已经证实在一定浓度范围内,TRAIL能够诱导人多发性骨髓瘤细胞株RPMI8226凋亡,并且这种作用呈时间剂量依赖性,并且也证实了TRAIL可以上调人多发性骨髓瘤细胞株RPMI8226表面粘附分子CXCR4的表达。本研究是在此前研究取得成果的基础上进一步探讨TRAIL在诱导凋亡过程中p38 MAPK的作用以及与CXCR4的关系,以人多发性骨髓瘤细胞株RPMI8226为研究对象,分别从两个方面进行研究:第一,TRAIL引起人多发性骨髓瘤细胞株RPMI8226表面粘附分子CXCR4的表达上调,探讨MM细胞p38MAPK的表达情况,以及与CXCR4表达的关系。第二,同样的实验条件下,加入p38MAPK抑制剂,观察CXCR4的表达情况。通过以上研究探讨TRAIL对人多发性骨髓瘤的作用机制,从而为本药的临床应用提供理论基础。方法:1.人多发性骨髓瘤细胞株RPMI8226的培养和传代人多发性骨髓瘤细胞株RPMI8226培养于含30%灭活胎牛血清(FBS)、100U/ml的青霉素和100μg/ml硫酸链霉素的RPMI1640培养液中,置37℃、体积分数为5%的二氧化碳的培养箱中培养,每3~4天传代1次,实验用对数生长期的细胞。2. TRAIL对人多发性骨髓瘤细胞株RPMI8226细胞p38MAPK和CXCR4表达的影响2.1取对数生长期的RPMI8226细胞,调整细胞密度为2×10~5/ml,接种于12孔培养板,加入不同浓度TRAIL作用24h后,收集细胞,用冷PBS洗两遍后,用于实验或-80℃保存备用。2.2半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测不同浓度TRAIL作用于RPMI8226细胞24h后,p38MAPK和CXCR4表达的变化。2.3实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测不同浓度TRAIL作用于RPMI8226细胞24h后,p38MAPK和CXCR4表达的变化。3.同样实验条件下,加入p38MAPK抑制剂后,CXCR4表达的影响3.1半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测加入p38MAPK抑制剂后,CXCR4表达的变化。3.2实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测加入p38MAPK抑制剂后,CXCR4表达的变化。结果:1.半定量RT-PCR和实时荧光定量RT-PCR检测TRAIL作用于RPMI8226细胞24h后,随着TRAIL浓度的增加,细胞CXCR4和p38MAPK的表达水平呈上升趋势。2.同样实验条件下,加入p38MAPK抑制剂后,p38MAPK的表达消失,而CXCR4的表达水平,随着TRAIL浓度的增加,仍呈上升趋势,与之前无明显差异。结论:1. TRAIL能够上调人多发性骨髓瘤细胞株RPMI8226细胞CXCR4和p38MAPK的表达水平。2. TRAIL上调人多发性骨髓瘤细胞株RPMI8226细胞CXCR4的表达机制与p38MAPK的表达与否无明显相关性。