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小分子干扰RNA (siRNA)细胞内诱导内源性基因沉默的现象为RNA干扰(RNAi),作为一种高效、低毒、特异性强的基因治疗方法,RNAi技术已经广泛应用于多种疾病的治疗研究。由于生物体内大量的核酸酶可降解siRNA,荷负电的细胞表面排斥负电性核酸物质进入细胞,故siRNA直接使用无法发挥其功效,需借助合适的载体保护siRNA在体内递送过程中的稳定性并递送其至细胞内,以充分发挥其功效。本文利用离子交联法制备功能化修饰的壳聚糖衍生物纳米粒,包载siRNA,研究载药纳米粒在胃肠道的稳定性及溃疡性结肠炎模型小鼠口服给药的体内功效。以三聚磷酸钠(TPP)、透明质酸(HA)为交联剂,壳聚糖(CS)、壳聚糖季铵盐(TMC)、巯基化壳聚糖季铵盐(TC)、半乳糖修饰的巯基化壳聚糖季铵盐(GTC)为载体材料,制备8种壳聚糖衍生物纳米粒,包载siRNA,研究纳米粒粒径、Zeta电势、胃肠道稳定性、巨噬细胞黏附和摄取。结果表明,载siRNA壳聚糖衍生物纳米粒粒径为140-220nm,Zeta电势为20-45mV；载siRNA的TPP交联TC纳米粒(TC/TPP NPs)和载siRNA的TPP交联GTC纳米粒(GTC/TPPNPs)胃肠道稳定性较好,可显著改善siRNA在体液中的稳定性；由于活化巨噬细胞表面存在半乳糖受体,GTC/TPP NPs对脂多糖(LPS)活化的Raw264.7细胞的黏附作用显著增强,细胞摄取效率提高。以GTC/TPP NPs包载丝裂原激活蛋白激酶激酶激酶激酶4(Mitogen-activated protein kinase kinase kinase kinase4, Map4k4) siRNA (siMap4k4-),考察对巨噬细胞毒性和体外转染效果。结果表明当siMap4k4浓度达0-2μg/mL, GTC/TPP NP s对LPS活化的Raw264.7细胞无明显毒性；载siMap4k4的GTC/TPP NPs可高效介导巨噬细胞基因沉默,有效抑制LPS诱导的TNF-α表达,且抑制率显著高于无半乳糖配体修饰的纳米粒。以葡聚糖硫酸钠(DSS)构建小鼠溃疡性结肠炎模型,研究小鼠口服含siRNA的GTC/TPP NPs后,血浆和组织中siRNA的分布,结果表明GTC/TPP NPs经口服后主要聚集于炎症结肠组织,仅少量经小肠吸收进入血液循环。研究小鼠口服载siMap4k4的GTC/TPP NPs对溃疡性结肠炎的治疗作用,结果表明可有效缓解小鼠溃疡性结肠炎症状,减少结肠组织中TNF-α蛋白质、[NF-α mRNA和Map4k4mRNA的表达,降低髓过氧化物酶(MPO)的活性。GTC/TPP NPs可提高siMap4k4口服给药对溃疡性结肠炎的治疗功效。