三种天南星科植物内生固氮菌分离及特性研究

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本研究采用DN和CCM无氮培养基,结合乙炔还原法测定固氮酶活性,从三种天南星科植物中经平板划线法共分离筛选到60株内生固氮菌,并利用全细胞蛋白电泳、插入序列指纹图谱和唯一碳源利用对其进行聚类分析,选取部分代表菌株进行16S rDNA序列测定。选取部分固氮活性较高的内生固氮菌,对其进行特性研究,包括不同温度、pH、渗透压、铵离子等环境因子对这些菌株固氮酶活性的影响,溶磷、分泌生长素和促进水稻生长特性,得出以下结果: 以龟背竹、芋和海芋的根、茎、叶为材料,采用碳源不同的选择性培养基,结合乙炔还原法测定固氮酶活性,通过PCR扩增固氮酶,nifH基因,分离得到60株内生固氮菌,其中龟背竹中15株,海芋中20株,芋中25株。各菌株固氮酶活性差异较大,范围为:46.81~1716.71 nmol C<,2>H<,2>/mL·h,wu38固氮酶活性最高。 采用IS-PCR、SDS-PAGE、唯一碳源利用三种聚类方法对分离自龟背竹、芋和海芋的60株内生固氮菌进行聚类。结果表明各种方法差异较小,有较好的一致性。由16S rDNA测序结果和系统发育分析得知,这些菌株分别与肠杆菌科中的胡萝卜果胶杆菌(Pectobacterium carotovorum)、菊欧文氏菌(Pectobacterium chrysanthemi)、肺炎克雷伯氏菌(Klebsiella pneumoniae)、阿氏肠杆菌(Enterobacter,asburiae)、阴沟肠杆菌(Enterobacter cloacae)亲缘关系较近。 从各类群中挑选代表菌株对其进行了固氮特性研究,结果表明,各供试菌株对pH值、盐浓度、铵离子的适应范围较广,对温度比较敏感。除菌株wu2外,均能在pH5.0~10.0下固氮,最适固氮pH为7.0~8.0;除wu2和wu3在NaCl浓度达到2%时已无固氮酶活性外,其余5株菌在NaCl浓度达到3%时均能表现出固氮酶活性,其中wu38在NaCl浓度达到4%时还能表现出微弱的固氮酶活性;7株供试菌株均可以在NH<,4><+>浓度为0.5 mM~2.5 mM下固氮,其中wu2和wu38在NH<,4><+>浓度达到7.5mM时仍可以固氮;供试菌株在15℃和45℃下都没有固氮酶活性,除菌株wu2在22.5℃时仍无固氮酶活性外,其余菌株都可以在22.5℃和37.5℃之间固氮。 对其中8株供试菌株溶磷性和分泌生长素特性进行了定性和定量测定,结果表明其有效磷增量在4.81±0.14~37.70±1.36μg/mL范围之间;供试菌株都具有分泌生长素的能力,但产生IAA的能力差异较大,其中菌株wu3分泌IAA能力最高,为72.26±4.2μg/mL,其余供试菌株均在20μg/mL以下。 5株供试菌株回接于水稻之后,均对水稻生长有促进作用,与对照相比,地上部分长的更高,枝叶更茂盛,色泽更浓绿。与对照相比,除wu33对根长的差异不显著外,所有菌株对株高、根长、鲜重均达到显著水平。
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