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食线虫真菌寡孢节丛孢(Arthrobotrys oligospora)是研究食线虫真菌与宿主线虫相互作用最为深入的模式菌株。在线虫诱导下可发生从腐生到寄生的生活史转变,菌丝特化形成粘性三维菌网,然后用粘性三维菌网捕捉线虫,最后菌丝从体壁侵入线虫体内将线虫消解。本研究以寡孢节丛孢细胞壁为研究对象,通过蛋白质组学和实时定量PCR的方法研究细胞壁相关蛋白与其生活史转变中的形态发生和侵染机制的关系。 首先通过线虫的匀浆液诱导寡孢节丛孢产生大量粘性三维菌网,通过机械破碎和低速离心分离普通菌丝和粘性三维菌网的细胞壁,使其不含完整细胞和细胞质成分,通过表面活性剂和酶的顺序处理,分步将细胞壁蛋白从细胞壁骨架(葡聚糖和几丁质)上解离下来。然后通过同重同位素相对与绝对定量(Isobaric Tags for Relative and AbsoluteQuantitation,iTRAQ)和LC/MS对细胞壁蛋白质进行分析和鉴定得到95个细胞壁蛋白,另外通过生物信息学的方法分别从寡孢节丛孢基因组数据库和假定蛋白数据库中获得35个磷脂酰肌醇(GPI)保守序列的蛋白和94个细胞壁形态学相关蛋白。最后应用Real-Time PCR对这些细胞壁相关蛋白在两种生活阶段下的转录水平进行分析。 分析结果揭示了细胞壁上存在一系列与侵染线虫有关的毒力蛋白,如粘附素、丝氨酸蛋白酶等。另外,通过对实验结果的分析说明了糖基水解酶在寡孢节丛孢捕食器官形成过程中发挥着重要作用。捕器上的粘附素可能有两种功能:黏住线虫和含有各种分泌的毒力蛋白混合物。本研究首次以细胞壁为研究对象鉴定了食线虫真菌寡孢节丛孢侵染宿主线虫过程中捕捉和侵染相关的细胞壁蛋白成员。 本论文的创新性主要体现为: 1)首次分离获得寡孢节丛孢细胞壁,并通过表面活性剂和酶顺序处理获得细胞壁蛋白质; 2)通过蛋白组学和实时定量PCR的方法研究寡孢节丛孢两种生活史下细胞壁相关蛋白的表达和转录水平,结果揭示了细胞壁上存在一系列与捕捉和侵染线虫相关的毒力蛋白,为改造食线虫真菌,构建高效线虫生防菌株奠定基础。