我们从本实验室构建的家蚕cDNA文库中筛选得到一条cDNA,经生物信息学分析发现其包含一个小的Mago-bind superfamily保守结构域,命名为Bormbyx mori Within bgcnhomolog(Bm Wibg)。BmWibg基因含有一个内含子,cDNA长为853bp,ORF大小为582bp,编码193个氨基酸残基,预测分子量为21.86kD,等电点为9.538。　　 本实验根据cDNA序列的ORF框设计上下游引物,PCR扩增出目的基因,插入融合表达载体pET-28a(+),成功构建重组表达质粒,经PCR、酶切鉴定以及测序分析证实重组正确。重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,菌体诱导后经SDS-PAGE鉴定目的蛋白表达成功,并通过Ni-NTA柱亲和层析得到纯化的重组蛋白,经质谱鉴定蛋白大小与预测的相符。用该重组蛋白免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,ELISA检测效价在1:25600以上。提取家蚕各时期及组织的RNA,设计特异引物利用RT-PCR检测BmWibg在转录水平上差异。结果表明:在各时期中,基因BmWibg在卵中的转录水平最高,蛾中最低;各组织中.BmWibg基因在精巢中的转录水平最高。提取家蚕卵、五龄幼虫、蛹和蛾四个时期及五龄幼虫的头、精巢和丝腺等组织的总蛋白,进行免疫印迹实验,结果显示,BmWibg蛋白在家蚕五龄幼虫、蛹和卵均检测到表达信号,而在蛾中没有检测到BmWibg蛋白,在组织中只检测到丝腺、精巢和头。ELISA半定量结果显示,各时期中蛋白含量亦是卵中最高蛾中最低,各组织中丝腺和精巢中BmWibg含量最高。这三种方法分别从转录水平和表达水平检测BmWibg的分布,其结果基本一致。以家蚕BmN细胞进行免疫细胞化学实验,结果显示,BmWibg蛋白在细胞质中均匀分布。我们推测BmWibg基因是重要的家蚕早期生殖分化相关的基因。这些结果为深入研究家蚕Bmmbg基因的功能奠定了基础。