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本文以山苍子精油为研究对象,以精油乳液的粒径大小以及稳定性为指标,制备可稀释型山苍子精油纳米乳液;通过细菌分离鉴定、药敏试验、细菌致病性试验、耐药基因以及毒力基因的检测,筛选出合适的多重耐药大肠杆菌,探索山苍子精油纳米乳液对其的抑菌机制;通过转录组技术进一步研究山苍子精油纳米乳液对多重耐药大肠杆菌的抑菌机制;通过小鼠疾病模型试验,得到全数致死量浓度和半数致死量浓度,并通过对试验小鼠的临床观察、剖检结果以及血常规的检测结果,初步探索山苍子精油纳米乳液对多重耐药大肠杆菌感染的动物模型的预防作用。具体试验结果如下:1、结果表明,当以混合表面活性剂(即吐温80:无水乙醇=2:1)为11.73%(m/m),山苍子精油为10.65%(m/m),无菌纯水为77.62%(m/m)的组成比例制备的山苍子精油纳米乳液的平均粒径为49.23±1.23 nm(n=5),多分散系数(PDI)为0.153±0.003,且将此乳液放置90 d后仍然处于稳定状态。2、本次实验共分离出15株大肠杆菌,对细菌耐药性、耐药基因、毒力基因以及小鼠攻毒试验结果进行综合分析,筛选出了一株含有tet A、bla CTX-M-U、bla CTX-M-9、mcr-1、Sul1、fos A3等6个耐药基因,fim C、omp A、Iss2、yijp、ibe B、ibe A、mat、sod A、R1等9个毒力基因,且使小鼠发病病程相对较长的多重耐药致病性大肠杆菌。3、对透射电镜结果分析,发现山苍子精油纳米乳液对多重耐药大肠杆菌细胞膜具有破坏作用。对山苍子精油纳米乳液处理期间细胞内生物大分子和酶的定性定量分析,发现其可以导致胞内大分子物质发生外泄现象,同时可以抑制大肠杆菌的能量代谢,降低能量代谢过程中关键调解酶的活性,使菌体不具有从外界吸收营养物质的能力。4、对山苍子精油纳米乳作用前后大肠杆菌的转录组研究,发现683个差异基因,其中上调基因367个,下调基因316个。对GO功能富集分析,发现上调基因主要是与核糖体降解有关的基因,如dea D、pcn B、Dna K等基因;下调基因主要是与膜受体及能量代谢相关的基因,如mcp、ula B、Nap AB等基因。对KEGG信号通路富集分析,发现差异基因主要是在磷酸转移酶系统(PTS)、氮代谢、不同环境中的微生物代谢、细菌趋化性、核糖核酸降解等信号通路富集,且编码物质代谢通路和能量代谢通路上的多种酶和蛋白的基因表达发生下调。5、细菌的全数致死量为7.5×10~8CFU/m L,半数致死量为3.8×10~8CFU/m L。对攻毒后的小鼠进行解剖发现,模型组小鼠的肝脏出现明显病变;对照组小鼠的肝脏无明显的病理变化。山苍子精油纳米乳液能在一定程度上可以提高白细胞、血小板的数目,增强机体的抵抗力,延缓病程的发展,对大肠杆菌疾病有一定的预防作用。