第一部分 肝癌ADC值与病理特点、分子标记物Ki-67表达水平的相关性研究研究背景肝细胞肝癌(HCC)是最常见的肝脏恶性肿瘤,居恶性肿瘤死亡率第3位。治疗手段主要包括手术切除、肝移植、射频消融、肝动脉化疗栓塞(TACE)、放射治疗、免疫治疗及分子靶向药物治疗等。目前预测HCC的治疗反应、术后复发及预后的指标包括：肿瘤的分化程度、大小、微血管浸润、门静脉癌栓及卫星灶、甲胎蛋白(AFP)等。这些肿瘤的特征预测患者预后的敏感性较低。细胞核Ki-67蛋白表达与细胞的增殖能力和肿瘤的侵袭性密切相关,Ki-67表达可以预测肿瘤的预后。目前,Ki-67最常用的分析方法为免疫组织化学,为获取肿瘤增殖信息需要手术切除或穿刺标本。扩散加权成像(DWI)可应用于实体肿瘤的检出、肿瘤特征的描述、肿瘤治疗反应及预后的评估等。ADC值可以用来测量肿瘤内细胞凋亡及增殖指数,并反映肿瘤浸润和增殖能力；但尚没有研究关注ADC值与HCC肿瘤Ki-67表达水平的相关性。本研究的主要目的是探讨ADC值与Ki-67的相关性,进而应用ADC值非侵袭性方法检测评估肝细胞肝癌的细胞增殖能力。资料与方法回顾性分析2009年10月～2015年5月间确诊为HCC患者,共76例入组。所有患者均在术前1周内接受MRI检查,序列包括T1WI、DCE-T1WI、T2WI和DWI序列,检查前未接受任何抗肿瘤治疗。MR图像分析：ADC图在工作站上自动生成。两位腹部磁共振专家对DWI图像进行盲法分析,在评价过程中存在分歧时,2位专家共同商讨达成共识。在ADC图上手动勾画病变的感兴趣区(ROIs),每个病变测量3次,平均值作为病灶ADC值。Ki-67的检测：Ki-67表达水平通过免疫组织化学染色法检测。细胞核为褐色或黄色时Ki-67为阳性；半定量分析：阳性细胞数<10%为低表达,阳性细胞数>10%为高表达。Ki-67的表达、ADC值与临床病理特征间的关系用卡方检验进行统计分析。Pearson相关性检验用于统计ADC值与Ki-67表达间的相关性；当r>0为正相关,r<0为负相关。所有统计学分析,当p<0.05为统计学有显著性差异。应用SPSS 17.0软件进行统计分析。结果76例患者Ki67阳性率0%至62%。穿刺活检组低表达20例,高表达16例；手术切除组低表达18例,高表达22例；两组之间行卡方检验,p=0.358,表达无差异。穿刺活检组：Ki-67表达水平与分化程度相关(p=0.021)。Ki-67表达水平与年龄、性别、Child-Pugh分级、肿瘤最大直径、血清AFP水平不相关。肿瘤切除组结果与穿刺活检组相近,只有肝细胞肝癌分化程度与Ki67表达相关(p=0.018)。所有病灶ADC值为0.562x 10-3mm/s～1.652×10-3mm2/s。ADC值与肿瘤位置、肿瘤大小、Child-Pugh分级、AFP数值均不相关。ADC值与肿瘤分化相关。穿刺活检组：低分化平均ADC值为(0.957±0.200)×10-3mm2/s;中分化(1.149±0.227)×10-3mm2/s；高分化(1.259±0.189)×10-3mm2/s, p=0.036。手术组：低分化平均ADC值为(0.945±0.118)×10-3mm2/s；中分化(1.071±0.236)×10-3mm2/s；高分化(1.194±0.0.206)×10-3mm2/s, p=0.017。总人群Ki-67高表达组平均ADC值为(0.983±0.21)×10-3mm2/s,低表达组ADC值为(1.191±0.235)×10-3mm2/s；Ki67与ADC值呈负相关(1=-0.410,p<0.001)；Ki67不分类,作为连续数值与ADC做相关分析也呈负相关(r=-0.450,p<0.001)。结论本研究对肝细胞肝癌的DWI特征与病理特征、肿瘤分子标记物间的关系进行了系统研究。结果显示ADC值与Ki-67的表达有一定的相关性。DWI可以作为衡量肝细胞肝癌细胞增殖的非侵袭性方法。DWI有可能作为一个理想的非侵袭性的方式评价肝细胞肝癌的进展及抗肿瘤治疗的反应。第二部分 肝癌3.0T MRI的成像特征与分子标记物VEGF的相关性研究研究背景肝细胞肝癌(HCC)是最常见的肝脏原发恶性肿瘤,死亡率居恶性肿瘤第3位。抗血管生成靶向药物能够改善HCC患者的生存,已应用于临床,分子标记物血管表皮生长因子(VEGF)的表达与HCC患者对索拉非尼治疗反应存在一定的相关性。VEGF是肿瘤血管生成中的重要调控因子,其促使肿瘤血管生成及肿瘤内血管的成熟；肿瘤内血管的多少及分布情况,影响肿瘤的强化特点及ADC值。在部分实性肿瘤恶性肿瘤中ADC值与VEGF的表达存在一定的相关性。但目前对ADC值与肝细胞肝癌VEGF的表达水平间的联系研究较少。本研究的主要目的是探讨肝细胞肝癌的ADC值与VEGF表达水平间的关系,以应用无创性MR检查评价HCC内VEGF表达水平,进而预测并评价抗VEGF药物的疗效等。材料与方法选取我中心2010年9月～2014年1月经手术病理证实的HCC患者。所有患者均在术前1周内接受MRI检查(扫描序列包括：T1WI、T2WI、正反相位、动态MR扫描及DWI), MR检查前均未行任何抗肿瘤治疗。ADC图依据DWI图像自动生成,在ADC图上测量病灶的ADC值,当病变较大包含多个ROI时,平均ADC值依据公式计算所有ROI的平均值得出；测量T1WI预扫、动脉期、门脉期及平衡期各期病灶的T1值,计算各期病灶的强化程度并记录。肝细胞肝癌细胞VEGF表达水平通过免疫组织化学染色法检测。VEGF免疫组化结果由2名病理医生进行定性及半定量评价：细胞浆为褐色或黄色时VEGF为阳性；VEGF半定量分析,依据肿瘤细胞阳性率的百分比分为3级：0级：<10%的肿瘤细胞着色,1级：10-50%肿瘤细胞着色,2级：>50%肿瘤细胞着色。肿瘤各期强化程度、ADC值与VEGF表达间的相关性应用Pearson相关性检验进行统计分析。统计应用SPSS17.0软件处理。结果36例HCC患者年龄33～74岁,平均年龄为53.54±9.9岁。Child-Pugh分级：A级33例、B级2例、C级1例。低分化8例,中分化21例,高分化7例。血清AFP水平：<20 ng/ml14例,≥20ng/ml22例。27例肿瘤位于肝脏右叶,其余9例位于肝脏左叶。肿瘤最大径约2.4cm～12.3cm,其中<3cm 14例,≥3cm22例。VEGF的表达水平：0级14例,1级12例,2级10例。VEGF表达水平和肿瘤分化程度、AFP水平不相关。所有肝细胞肝癌病灶的平均ADC值为(0.959±0.205)×10-3mm2/s。VEGF不同表达水平的ADC值分别为：0级(1.042±0.168)×10-3mm2/s,1级(0.983±0.169)×10-3mm2/s,2级(0.816±0.234)×10-3mm2/s。肿瘤VEGF表达水平与ADC值呈负相关(r=-0.435,p=0.008)。肿瘤动脉期强化程度与VEGF表达水平呈明显负相关(r=-0.386,p=0.02),但VEGF分级与肿瘤门脉期及平衡期的强化程度间没有明显相关性。结论在肝细胞肝癌中,ADC值及动脉期强化程度与VEGF的表达相关。这些磁共振特征也许可以用来评估肝细胞肝癌中肿瘤血管的生成,进而为临床应用ADC值预测HCC患者应用抗血管生成药物的治疗反应、评价疗效。