论文部分内容阅读
目的:
应用噬菌体展示技术对入骨肉瘤细胞进行体外筛选,筛选出骨肉瘤特异性结合多肽,作为人骨肉瘤靶向分子成像、分子靶向治疗的载体。
材料与方法:
应用Ph.D.TM-12噬菌体展示库,采用差减筛选方法,以人正常肾胚胎细胞293T作为减性筛选的对照组细胞,人骨肉瘤143B作为靶向筛选细胞,剔除非特异性噬菌体,获得高度富集与骨肉瘤相关结合的噬菌体。经过四轮生物筛选后测序得到多肽。筛选所获得多肽以及表达该多肽的噬菌体分别用荧光染料Cy5.5以及FITC标记,进行体外细胞、组织荧光染色以及活体光学分子成像。合成光学分子成像探针:将OSP-1及OSP-S用Cy5.5进行化学标记,标记后对荧光染料Cy5.5的荧光特性进行检测;对Cy5.5-OSP-1靶向入骨肉瘤细胞系143B的生物活性进行检测,验证其能否与143B肿瘤细胞特异结合。同时,该多肽进一步用18F标记,进行活体PET分子成像、靶向性分子探针体外细胞摄取实验以及探针在小动物活体体内分布实验。
结果:
四轮生物筛选后获得多肽ASGALSPSRLDT,命名为OSP-1(Osteosarcoma Peptide-1)。OSP-1与乙酰肝素酶家族Ⅱ/Ⅲ蛋白共享相同氨基酸序列。乙酰肝素酶家族Ⅱ/Ⅲ蛋白能够与硫酸乙酰肝素糖蛋白(heparan sulfate proteoglycans,HSPGs)特异性结合并相互作用。荧光染色显示FITC-OSP-l-phage和Cy5.5-OSP-1对于骨肉瘤细胞系具有极强的亲和作用。与减性筛选的对照组293T细胞未见结合,与非骨肉瘤对照组的人头颈癌细胞UM-SCC1仅有少量结合。离体细胞摄取及活体动物模型成像皆显示143B细胞或143B肿瘤对于Cy5.5-OSP-1或18F-OSP-l有极其明显的摄取,并且在143B细胞/肿瘤中摄取程度明显高于在UM-SCC1细胞/肿瘤中的摄取程度。l8F-FP.OSP.1在143B肿瘤中的T/NT比率明显高于18F-FP-OSP-S在143B中的T/NT比率(P<0.05)。
结论:
我们的研究表明OSP-1为人骨肉瘤特异性结合多肽,其潜在靶点为硫酸乙酰肝素糖蛋白(HSPGs)。多种示踪剂标记的OSP-1可作为骨肉瘤靶向分子探针用于骨肉瘤多模式成像,并具备进一步开发成为能够用于临床骨肉瘤早早期诊断及鉴别诊断的靶向探针潜能,用于骨肉瘤的分子靶向治疗及治疗监测之中。