拟南芥脂肪酸硫酯酶和棕榈化酰基修饰转移酶基因家族的表达及功能研究

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酰基载体蛋白硫酯酶在植物种子中脂肪酸的贮存及种类和含量,植物从质体中输出的脂肪酸的链长及饱和性都起着很重要的作用,它能催化脂肪酸合成过程中的脂酰基-ACP脱去ACP释放游离的脂肪酸。高等植物中存在两种脂肪酸硫酯酶(Fatty acidthioesterase Fat),分别为FatA和FatB,FatA更偏向于不饱和脂肪酸作为底物,FatB偏向于饱和脂肪酸作为底物。我们利用反向遗传学的方法来研究FatA在植物种子油积累过程中的作用。拟南芥FatA家族包含两个基因At3g25110和At4g13050,通过实时定量我们发现At3g25110几乎在拟南芥所有组织都不表达而At4g13050在幼嫩和成熟种子中表达量很高。因此我们首先获得了At4g13050基因的T-DNA插入纯和突变体Salk-111046C,经鉴定发现T-DNA插入到启动子上游第178个碱基处。对突变体种子脂肪酸进行测定,发现与野生型相比突变体种子的脂肪酸组分都有不同程度的增加,只有20:0脂肪酸含量略有下降。蛋白质棕榈酰化是指通过巯基键将一个脂质分子连接到一个蛋白质分子的半胱氨酸残基的常见的遗传翻译后的修饰现象。这个反应是在棕榈酰基转移酶palmitoyltransferases(PATs)的催化作用下完成的,PAT参与调解细胞的信号转导、细胞膜运输、突出传递等生物过程。在拟南芥的基因组中包含20个编码PAT的基因。通过对拟南芥PAT基因家族系统发育分析、不同组织的表达模式、以及在压力应答下各个基因的表达情况等的研究,我们发现除了保守的DHHC结构域,拟南芥PAT基因家族20个基因的cDNA序列有30%到60%的相似性。利用实时定量的方法确定了PAT基因家族的除了At2g40990在各个组织都检测不到表达,其他19个基因在花、叶、茎、根、幼苗、幼嫩果荚和成熟果荚中都有不同程度的表达。另外,PATs家族的成员在不同胁迫处理下的表达模式不同。
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