洋虫成虫蛋白酶解液的制备及抗氧化功能研究

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洋虫(Martianus dermestoides Chevrolat)体内含有丰富的营养物质,包括多种人体必需氨基酸、维生素、微量元素和不饱和脂肪酸等,具有较高的开发价值。本文以洋虫成虫为原料,首次研究了洋虫成虫蛋白的提取、酶解以及蛋白酶解液在抗氧化方面的活性,确定了蛋白最佳提取方法,并优化了酶解工艺,分离、制备出活性较高的洋虫成虫蛋白类物质,并对其具有的抗氧化和抗衰老活性进行了研究和分析。结果如下:分别采用稀碱法、盐提法和缓冲液(Tris-HC1)法研究了洋虫成虫蛋白的提取,其中,稀碱提蛋白法的蛋白质得率最高,最佳工艺指标为:碱液浓度1.0%、温度80℃、时间60min、固液比1∶15时蛋白质得率有最大值;其次为Tris-HC1提蛋白法,最佳工艺指标为:Tris-HC1液pH值8.1、抽提温度10℃、抽提时间30min、固液比1∶10时蛋白质得率有最大值;盐提蛋白法得率最低,最佳工艺指标为:盐液浓度1.0%、温度20℃、时间2h、固液比1∶10时蛋白质得率有最大值。3种方法比较,稀碱法提取效果最佳。洋虫成虫蛋白脱脂后,分别利用木瓜蛋白酶、中性蛋白酶、胰蛋白酶和胃蛋白酶对脱脂洋虫成虫蛋白进行酶解,分析各种蛋白酶的水解效率、蛋白溶出系数以及平均肽链长度。结果发现,木瓜蛋白酶酶解液中的各项指标均达到了较优水平,即水解效率可达19.61%、蛋白溶出系数为2.52、平均肽链长度为5.10左右。因此,确定木瓜蛋白酶为首选用酶。研究了酶用量、温度、pH值、时间、底物浓度等条件对洋虫成虫蛋白水解度(DH)的影响。分析影响较大的因素,确定其水平变化范围,通过4因子二次旋转回归正交实验设计响应面分析,获得最佳酶解工艺条件为:木瓜蛋白酶用量2225U/g,温度42℃,时间4h时,水解度可达到22.67%。用截留分子量分别为10000Da和6000Da的超滤膜将洋虫成虫蛋白酶解液分离成3个组份,并在体外非油体系中,分别对不同分子量大小组份的抗氧化活性进行研究。所得结果与强抗氧化剂V_C相比表明:3个组份都具有较强的清除DPPH自由基、羟自由基和超氧自由基的能力,而且还原能力较强。但是,其中以组份Ⅰ(分子量<6000 Da)的抗氧化能力最强,它能很好的清除超氧阴离子自由基,但清除效果与V_C相比,差异不显著;清除羟基自由基的效果与V_C相持平;清除DPPH自由基及其还原能力要显著强于V_C。研究了洋虫成虫蛋白酶解液的抗衰老作用。结果表明,同衰老模型组相比,洋虫成虫蛋白酶解液中剂量、高剂量试验组小鼠肝中超氧化物歧化酶(SOD)活性差异均达到了显著水平(P<0.05),其中以中剂量组为最佳,达到了极显著水平(P<0.01);对血清SOD和脑中SOD的影响,仅中剂量与衰老模型相比差异显著(P<0.05),其余各给药组差异不显著。对血清谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)活性的影响为:中剂量组最佳,差异极显著(P<0.01),低剂量组和高剂量组有显著性差异(P<0.05)。对肝GSH-PX的影响为:中剂量组和高剂量组与衰老模型组相比差异均极显著(P<0.01),低剂量组有显著性差异(P<0.05)。对血清中丙二醛(MDA)的影响以洋虫成虫蛋白酶解液中、低剂量组为最佳,差异极显著(P<0.01)。说明洋虫成虫蛋白酶解液对小鼠衰老具有一定的抑制作用。
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