论文部分内容阅读
安徽砀山地区梨资源丰富,砀山酥梨在世界水果市场占据重要地位。由于梨遗传背景复杂,种内变化大,加上种间杂交,使砀山地区梨在长期的进化和栽培中形成了丰富的资源类型。对砀山地区梨种质资源进行研究,以达到合理利用这些资源,对加快梨育种进程有重要意义。本试验调查并收集了砀山地区梨24个资源类型,进行RAPD研究,主要结果如下:1、以CTAB法和SDS法提取了幼叶、成熟叶、韧皮部和芽中的DNA,通过纯度、颜色、产率、电泳,扩增结果等比较,认为CTAB法更适合梨基因组DNA提取。用幼叶提取的DNA,质量好,产率高;成熟叶用改良CTAB法提取也可得到适于RAPD分析的DNA;韧皮部和芽用上述两种方法提取,DNA产率均较低。2、用正交设计筛选出适合梨树的RAPD反应参数为:在25μl反应体系中,模板DNA 60ng、引物4pmol、dNTPs 5×10-9mol、10×PCR Buffer 2.0μl、MgCl2 5×10-8mol、Taq酶1.0U。3、运用6个引物的特异带构建出的梨DNA指纹图谱,可区分14个生物型中的9个。用8个引物的带型组合构建的指纹图谱,可将这14个资源类型全部区分。4、从60个随机引物中筛选出40个表现稳定的引物进行PCR扩增。砀山地区梨种质资源聚类分析表明,当阀值为68.6~70.4时,全部生物型可分为5类。第一类:砀山酥梨及其变异、鸭梨、雪花梨、莱阳慈梨和紫酥,主要是白梨;第二类:新高、丰水、二十世纪、皇冠和苍溪梨,除皇冠外,都为沙梨;库尔勒香梨和红香酥聚为一类;伏酥和豆梨各为一类。5、逐步判别分析显示,Fisher判别函数值只与引物S54 1500bp,S58 1375bp,S58 947bp和S1461831bp 4个位点有关,判别函数为:Y1= -27X1+18X2-18X3+18X4-19.609;Y2=9X1-3.60×10-15X2+3.597×10-15X3-3.60×10-15X4-5.209;Y3=31.5X1-13.5X2+22.5X3-13.5X4-19.609;Y4= 31.5X1-4.5X2+40.5X3-22.5X4-35.359。6、砀山酥梨的8个变异类型,用60个随机引物进行RAPD分析,与对照相比,变化的条带为:良梨早酥29条,锈酥10条,细皮酥6条,扁酥4条,黄花酥3条,棱酥2条,王酥1条,八怪酥无变化带。