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目的:比较银杏黄酮、蚯蚓纤溶酶及二者以不同浓度配比形成的配方药物对动脉粥样硬化大鼠的治疗效果,并对其作用机制进行初步探讨。
方法:60只Wistar大鼠随机分为空白对照组和动脉粥样硬化建模组。建模组使用高脂饲料、丙基硫氧嘧啶及维生素D3诱发动脉粥样硬化。至60天建模结束,将建模组34只存活鼠随机分为模型组(6只)、银杏黄酮治疗组(7只)、银杏黄酮+蚯蚓纤溶酶治疗组(7只)、高剂量银杏黄酮+蚯蚓纤溶酶治疗组(7只)、蚯蚓纤溶酶治疗组(7只)。空白组进食普通饲料,模型组大鼠继续进食高脂饲料,4个用药组大鼠继续进食高脂饲料并每日给予相应的药物灌胃,疗程30天。处死大鼠后检测血脂水平;主动脉壁油红O染色,计算斑块面积;主动脉壁石蜡切片HE染色,光镜观察。将小鼠巨噬细胞(J774A.1)分为银杏黄酮治疗组和蚯蚓纤溶酶治疗组,分别向两组加入六种浓度的银杏黄酮溶液和蚯蚓纤溶酶溶液,分别培养24、48、72小时,检测溶菌酶活性、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)活性和细胞吞噬能力。
结果:①药物治疗组大鼠血总胆固醇(TC)和低密度脂蛋白(LDL)明显低于模型组(均P<0.05),在各药物治疗组中,高剂量银杏黄酮+蚯蚓纤溶酶治疗组大鼠血清高密度脂蛋白(HDL)高于其余组(均P<0.05)。②模型组大鼠主动脉全段均可见不同程度的动脉粥样硬化病变,病变部位动脉内膜粗糙,呈细颗粒状向管内突起,有人鼙的钙盐结晶的沉积,HE染色光镜检布发现,管壁内有大量胆固醇结晶和钙盐沉积,呈较典型的粥样斑块的改变;Masson染色,见动脉局部基质沉积明显。药物治疗组大鼠的病变多出现在主动脉弓血管分支处,且病变面积明显小于模型组(均P<0.05),其中配方药物治疗组大鼠的病变面积小于单药治疗组(均P<0.05)。③银杏黄酮溶液培养的巨噬细胞的溶荫酶活性、细胞吞噬能力与药物浓度、培养时间正相关(均P<0.05),MMP-9的活性随药物浓度升高呈先升高后下降的趋势。④蚯蚓纤溶酶溶液培养的巨噬细胞的溶菌酶活性、细胞吞噬能力与药物浓度无明显相关性(均P>0.05),仅与培养时间正相关(均P<0.05);但MMP-9的活性随药物浓度升高、培养时间延长呈上升趋势。
结论:动物实验结果提示,动脉粥样硬化动物模型建模成功。银杏黄酮与蚯蚓纤溶酶均能不同程度地减轻大鼠动脉粥样硬化病变,其中高剂量银杏黄酮+蚯蚓纤溶酶治疗组作用最明显;体外实验表明银杏黄酮能够使巨噬细胞分泌溶菌酶增多,吞噬能力增强,发挥其抗炎抗氧化作用:蚯蚓纤溶酶可使巨噬细胞MMP-9的活性增强,从而促进细胞外基质降解,使大鼠动脉粥样硬化病变消退。