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泛素羧末端水解酶-1(UCH-L1)，又称为蛋白基因产物9.5(PGP9.5)，分子质量约24.8 kD，是由223个氨基酸组成的一类半胱氨酸水解酶。目前研究证实，UCH-L1具有去泛素化酶活性、泛素连接酶活性和稳定泛素单体的功能。人的大脑中存在大量的UCH-L1蛋白，免疫组化实验证实UCH-L1定位于神经元细胞内。因此大量的实验研究UCH-L1在神经细胞的功能和功能障碍中的作用。Gad模型小鼠UCH-L1表达缺失导致小鼠轴突发育不良。在阿尔兹海默病(AD)和帕金森氏病(PD)患者的脑组织可见UCH-L1表达下调和广泛氧化修饰。在另一 AD模型小鼠可见UCH-L1调控可以减轻淀β-淀粉样蛋白前体的形成，进而减轻突触可塑性和记忆功能的损伤。 目的：克隆目的基因UCH-L1，将目的基因UCH-L1连接到pcDNA4.0质粒上，从而构建出含有目的基因UCH-L1的质粒。 方法：在温箱培养人胚肾细胞(HEK293)，从细胞内提取总RNA，电泳实验证实提取RNA成功；用primer premier5.0设计引物，应用RT-PCR技术克隆并提取目的基因UCH-L1，用电泳实验证实目的基因UCH-L1提取成功；提取pcDNA4.0质粒，应用双酶切并与pcDNA4.0质粒在连接酶作用下连接，将连接产物转化入大肠杆菌中，以特异性基因引物做菌液PCR鉴定；取阳性克隆，并送上海生工进行技术测序。 结果：细胞内提取总RNA进行电泳检测，对RT-PCR提取的目的基因进行电泳检测及序列测定，结果与GenBank(BC000332)序列基本一致，对提取的UCH-L1质粒进行序列测定，测定结果与GenBank序列基本一致，并通过实验构建出了载有UCH-L1基因的质粒，经PCR及电泳测定后认为构建成功。 结论：载有UCH-L1基因的pcDNA4.0质粒的成功构建为其在神经元退行性疾病及肿瘤的医学机制研究及后续治疗中的应用提供基础。