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脑血管意外已成为我国第二大致死疾病。其中,缺血性脑卒中约占70%～80%,且死亡率、致残率高,严重危害人类健康。大量的动物实验和临床研究探索了防治缺血性脑损伤的措施,但这些措施的效果仍然有限。因此,寻找新的防治策略是一项亟待解决的课题。高压氧(HBO)已被证明是一种安全有效的治疗缺血性脑卒中的方法,然而,只有在脑缺血后6小时内实施HBO治疗,才能发挥其神经保护效应,过短的治疗时间窗限制了HBO在缺血性脑卒中病人中的广泛应用。而目前唯一被FDA批准应用于临床的非竞争性NMDA受体阻断剂memantine(MEM),也已经被证明对脑缺血性损伤有良好神经保护作用。然而,较大剂量的MEM会引起较明显的副作用,限制了其在临床的应用。因此,本研究采用大鼠大脑中动脉阻闭(Middle Cerebral Artery Occlusion,MACO)模型,探讨联合使用HBO和MEM治疗,是否有协同的神经保护作用,即在延长HBO的治疗时间窗的同时,降低MEM产生神经保护作用的剂量。并初步探讨了两者产生协同神经保护作用的机制。为HBO联合MEM治疗应用于临床提供理论依据。第一部分高压氧联合memantine治疗对大鼠局灶性脑缺血损伤的神经保护效应实验一HBO治疗对大鼠局灶性脑缺血损伤的神经保护效应及治疗时间窗目的验证HBO治疗对大鼠局灶性脑缺血损伤的神经保护效应及治疗时间窗。方法50只雄性SD大鼠,体重280-320g,随机分为5组(n=10):对照组(Con):即单纯局灶性脑缺血组;高压氧治疗组( T1h、T3h、T6h、T12h):即分别于局灶性脑缺血再灌注后1h、3h、6h、12h行高压氧治疗(1h,2.5ATA,100%O2)。采用线栓法制作大鼠局灶性脑缺血模型(MCAO)。脑缺血再灌注后24h行神经行为学评分(Garcia法),评分后处死动物,取大脑行2,3,5-氯化三苯四唑(TTC)染色,测量脑梗死容积百分比。结果T1h组、T3h组、T6h组神经功能学评分明显优于对照组,但三组间无显著性差异(P<0.01),T12h组与对照组比较无显著统计学差异。T1h组、T3h组、T6h组梗死容积百分比明显小于对照组,但三组间无显著性差异(P<0.01),T12h组与对照组之间无显著统计学差异。实验二MEM治疗对大鼠局灶性脑缺血损伤的神经保护效应目的探讨MEM治疗对大鼠局灶性脑缺血损伤的神经保护效应。方法40只雄性SD大鼠,体重280-320g,随机分为4组(n=10):溶剂对照组(CON):脑缺血后15min腹腔注射2%生理盐水1ml;MEM治疗组(5mg/kg、10mg/kg、20mg/kg):分别于脑缺血后15min腹腔注射MEM 5mg/kg、10mg/kg、20mg/kg (溶于1ml生理盐水)。采用线栓法制作大鼠局灶性脑缺血模型(MCAO)。脑缺血再灌注后24h行神经行为学评分(Garcia法),评分后处死动物,取大脑行2,3,5-氯化三苯四唑(TTC)染色,测量脑梗死容积百分比。结果MEM10mg/kg组(P<0.05)、MEM 20mg/kg(P<0.01)组神经功能学评分明显优于溶剂对照组,MEM 20mg/kg组神经功能学评分优于MEM10mg/kg组(P<0.01),MEM 5mg/kg组与溶剂对照组组间比较无显著统计学差异。MEM 10mg/kg组、MEM 20mg/kg组脑梗死容积明显小于溶剂对照组(P<0.01),MEM 20mg/kg组脑梗死容积小于MEM10mg/kg组(P<0.05)。MEM 5mg/kg组与溶剂对照组组间比较无显著统计学差异。实验三HBO联合MEM对大鼠局灶性脑缺血/再灌注损伤的神经保护效应目的探讨HBO联合MEM对大鼠局灶性脑缺血/再灌注损伤的神经保护效应。方法30只雄性SD大鼠,体重280-320g,随机分为3组(n=10):对照组(CON):即单纯局灶性脑缺血组;HBO联合MEM治疗A组(T1h + MEM20mg/kg):脑缺血后15min腹腔注射MEM20mg/kg,再灌注1h后行高压氧治疗;HBO联合MEM治疗B组(T12h+MEM5mg/kg):脑缺血后15min腹腔注射MEM5mg/kg,再灌注12h后行高压氧治疗。采用线栓法制作大鼠局灶性脑缺血模型(MCAO)。再灌注后24h行神经行为学评分(Garcia法),评分后处死动物,取大脑行2,3,5-氯化三苯四唑(TTC)染色,以测量脑梗死容积百分比。结果HBO联合MEM治疗A组和HBO联合MEM治疗B组神经行为学评分优于对照组(P<0.01),但两组间并无统计学差异。HBO联合MEM治疗A组和HBO联合MEM治疗B组梗死容积百分比明显小于对照组(P<0.01),但两组间并无统计学差异。第二部分高压氧联合memantine治疗后大鼠血脑屏障通透性的改变实验四HBO联合MEM治疗后大鼠血脑屏障通透性的改变目的研究HBO联合MEM治疗后大鼠血脑屏障通透性的改变。方法48只雄性SD大鼠,体重280-320g,随机分为8组(n=6):假手术组(Sham)、局灶性脑缺血组(CON)、高压氧治疗T1h和T12h组,MEM治疗5mg/kg和20mg/kg组,HBO联合MEM治疗A组(T1h+20mg/kg)和HBO联合MEM治疗B组(T12h+5mg/kg)。采用线栓法制作大鼠大脑中动脉阻闭局灶性脑缺血模型(MCAO)。分别于脑缺血再灌注即刻尾静脉注射2%伊文氏兰(EB)(4ml/kg)。脑缺血再灌注后24h处死动物,检测血脑屏障通透性。结果缺血半球:对照组EB含量明显高于假手术组;高压氧治疗T12h组和MEM 5mg/kg组EB含量与对照组相比无统计学差异;HBO治疗T1h组,MEM20mg/kg组及HBO联合MEM治疗A组及B组的EB含量明显低于对照组(P<0.01),但它们之间无显著性差异。非缺血半球各组间EB含量无统计学差异。实验五HBO联合MEM治疗后大鼠脑组织中炎症因子含量的变化目的探讨HBO联合MEM治疗后大鼠脑组织中炎症因子含量的变化。方法48只雄性SD大鼠,体重280-320g,随机分为8组(n=6):假手术组(Sham)、局灶性脑缺血组(CON)、HBO治疗T1h和T12h组,MEM治疗5mg/kg和20mg/kg组, HBO联合MEM治疗A组(T1h+20mg/kg)和HBO联合MEM治疗B组(T12h+5mg/kg)。采用线栓法制作大鼠大脑中动脉阻闭局灶性脑缺血模型(MCAO)。脑缺血再灌注后24h取脑组织,采用ABC-ELISA法检测IL-1β、TNFα、IL-6、IL-8、IL-10的含量。结果对照组较假手术组脑组织中炎症因子IL-1β、TNFα、IL-6、IL-8、IL-10含量显著升高(P<0.05)。HBO治疗T1h组、MEM 20mg/kg、HBO联合MEM治疗A组及B组均较对照组脑组织中的炎症因子IL-1β、TNFα、IL-6、IL-8含量明显降低,IL-10含量显著升高(P<0.05),但它们之间无显著性差异。HBO治疗T12h组、MEM 5mg/kg组较对照组脑组织中的炎症因子IL-1β、TNFα、IL-6、IL-8、IL-10含量无统计学差异(P>0.05)。结论1.再灌注后6h内进行HBO治疗对大鼠局灶性脑缺血损伤具有神经保护效应。2. MEM对大鼠局灶性脑缺血损伤有神经保护效应,且该效应具有剂量依赖性。3. HBO联合MEM治疗可将HBO治疗时间窗延长至再灌注后12h并将MEM的治疗剂量从20 mg/kg降低到5 mg/kg。4. HBO治疗和MEM治疗均能抑制脑缺血后血脑屏障的通透性,其抑制血脑屏障通透性的机制有部分相似性。5. HBO联合MEM治疗的神经保护效应可能是通过降低脑缺血再灌注后脑内炎症因子IL-1β、TNFα、IL-6、IL-8的含量,升高IL-10含量,从而降低血脑屏障通透性而实现。