产脂肪酶菌株Aspergillus oryzae WZ007的诱变及其发酵条件的优化与应用

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脂肪酶是重要的工业酶制剂品种之一,可以催化水解脂、酯交换、酯合成等反应,因而被广泛地应用于油脂加工、食品、医药、日化等工业。而通过不同的诱变方法对微生物进行诱变从而提高微生物的产酶能力是微生物育种工作中常用的手段。利用三种不同的诱变方法紫外诱变、γ射线诱变与微波诱变对实验室一株产脂肪酶的菌株Aspergillus oryzae WZ007进行了诱变,先经罗丹明平板初筛,然后通过摇瓶发酵测酶活力的方法对诱变菌株进行复筛,对筛选出的诱变菌株进行遗传稳定性试验,得到了一株酶活较高的诱变菌株Aspergillus oryzae FS4,其酶活力达到了21.66U/g,是原始出发菌株酶活力的165%。通过单因素实验、正交实验以及发酵培养条件的优化,显著提高了Aspergillus oryzae FS4发酵所产脂肪酶的酶活力,其最佳培养基组合为蔗糖1%,橄榄油1%(V/V),酵母膏2%,阿拉伯胶0.3%,K2HPO4 0.1%,MgSO4 0.05%,KCl 0.05%。最佳培养条件为:起始pH5.5,培养温度28℃,摇床转速180rpm。通过优化,诱变菌株所产脂肪酶的活力达到了37.27U/g,为原始菌株的278%。动力学模型的构建较好地反映了该菌株在优化后的液体发酵培养基中菌体细胞的生长情况与所产脂肪酶的合成情况。对A. oryzae FS4所产脂肪酶催化扁桃酸甲酯的反应条件进行了初步的研究,结果表明,A. oryzae FS4的最佳转化条件为:反应溶剂为pH为6.0的磷酸缓冲液(0.2mol/L),反应温度30℃,底物浓度0.02 mol/L,水浴摇床转速200rpm,反应时间20h。在该工艺条件下,底物的转化率为78.43%,底物对映体过量值为71.46%,E值为2.8。
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