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背景 哮喘(asthma)是小儿最常见的慢性疾病,其发病率呈持续上升趋势。如何采取行之有效的方法干预与防止哮喘已成为全球公众关注的焦点。已有的研究表明哮喘的发病机制是以 Th2 占优势,包括嗜酸性粒细胞、肥大细胞、中性粒细胞及气道上皮细胞等多种细胞参与的慢性气道炎症性疾病,具有气道高反应性和可逆性气道阻塞的特征,但是仅仅针对 Th2 分泌的细胞因子采取的治疗并不能完全有效减轻哮喘的气道炎症,因此不能将哮喘的发病简单归于 Th1/Th2 功能失衡。随着对免疫耐受机制的深入研究,调节性 T 细胞(Regulatory T cells, Tr)在哮喘发病中的作用已引起人们的高度重视。已有的研究表明儿童哮喘在发病机制与病理生理上与成人过敏性哮喘存在差异,何种细胞在儿童哮喘气道炎症的形成中扮演最重要的角色尚无定论。本文的第一部分着重探讨外周血特异性表达 Foxp3 的 CD4+CD25+调节性 T 细胞在儿童哮喘发病中的作用;第二部分我们讨论了哮喘患儿诱导痰细胞分类及与 IL-8,IL-9, eotaxin 的相关关系。 目的 1、比较哮喘患儿和正常儿童外周血 PBMC 及体外 PHA 刺激后CD4+CD25+ 细胞百分率; 2、比较哮喘患儿和正常儿童外周血 PBMC 及体外 PHA 刺激后Foxp3 表达水平,比较诱导痰中 Foxp3 表达水平; 3、比较不同阶段哮喘患儿血浆及培养上清液 IL-4、IL-10、IFN-重庆医科大学硕士研究生论文 3γ、TGF-β表达水平;4、分析 CD4+CD25+ 细胞百分率与 Foxp3 表达水平及细胞因子水平的相关关系;5、比较哮喘患儿和正常儿童诱导痰细胞分类和 IL-8 、IL-9e、otaxin(嗜酸性粒细胞趋化因子)水平。方法1、病例收集:10 例哮喘急性发作期患儿,10 例缓解期患儿,8例正常儿童作为对照;2、用流式细胞术双标法,检测哮喘患儿与正常对照 PBMC 在体外刺激培养前、后 CD4+CD25+细胞百分率;3、 用 RT-PCR 法,检测哮喘患儿与正常对照 PBMC 在体外刺激培养前、后 Foxp3 表达水平及诱导痰 Foxp3 表达水平;4、 用 ELISA 法,检测血浆及培养上清液 IL-4I、L-10I、FN-γ、TGF-β表达水平和诱导痰上清液 IL-8、IL-9、eotaxin 水平;5、 用 Pin 法,比较哮喘患儿与正常对照诱导痰细胞成分变化情况,分析诱导痰细胞学分类与 IL-8、IL-9、eotaxin 的相关关系。结果1、哮喘患儿 PBMC 中 CD4+CD25+细胞百分率在刺激培养前、后均明显低于正常儿童; 2、哮喘患儿 PBMC 和诱导痰 Foxp3-mRNA 表达水平明显下降,尤其在急性发作期;诱导痰 Foxp3-mRNA 水平与 PBMC Foxp3-mRNA水平呈正相关;3、 PBMC 在体外经 PHA 刺激培养 24h 后正常儿童 Foxp3-mRNA表达水平明显增高,同培养前比较有显著性差异,而哮喘患儿Foxp3-mRNA 表达水平刺激培养前后无显著性变化;4、哮喘急性发作期患儿血浆和培养上清液 IL-4、IL-10 水平明显