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目的:确定维药神香草活性部位提取工艺,观察其抗炎、平喘作用及其对哮喘大鼠炎症细胞、因子的影响,探讨其抗哮喘作用机理及其物质基础,从而为其临床应用提供科学依据。 方法:1)通过小鼠抗炎、止咳、祛痰实验,观察神香草水、醇提物及乙酸乙酯萃取部位抗炎、止咳、祛痰作用;2)采用OVA致敏和反复雾化法制备哮喘大鼠模型;通过HE染色观察肺组织病理改变;计数各组大鼠BALF中的白细胞分类及 EOS个数;采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测大鼠血清及BALF中ET-1水平、采用放射免疫法检测哮喘大鼠血清中的ET-1、IL-2、介IL-6、TNF-ɑ水平;3)以芦丁为标准品,采用比色法建立神香草总黄酮的含量测定方法;采用L9(34)正交试验,确定神香草总黄酮最佳提取工艺;采用L9(34)正交试验,确定 AB-8树脂对神香草总黄酮的最佳分离纯化工艺;以小鼠抗炎、止咳、祛痰实验,观察神香草总黄酮抗炎、止咳、祛痰作用;在大鼠哮喘模型的基础上,通过HE染色观察肺组织病理改变;计数各组大鼠BALF中的白细胞分类及EOS个数;采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测大鼠肺组织及BALF中TGF-β1水平;4)分别采用水蒸气蒸馏法及超临界 CO2萃取法提取神香草挥发油并对其进行 GC-MS分析;采用L9(34)正交试验,确定神香草挥发油的超临界最佳萃取工艺;以小鼠抗炎、止咳、祛痰实验,观察神香草水挥发油抗炎、止咳、祛痰作用;在大鼠哮喘模型的基础上,通过HE染色观察肺组织病理改变;计数各组大鼠BALF中的白细胞分类及EOS个数;采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测大鼠肺组织及BALF中TGF-β1平。 结果:1)与模型组比较,神香草水、醇提物及乙酸乙酯萃取部位具有抗炎、止咳、祛痰作用(P<0.05),其中乙酸乙酯萃取部位作用更显著;2)与模型组相比,神香草乙酸乙酯部位剂量组大鼠 BALF中细胞总数、Ly、Eos、Neu的百分比、ET-1水平及血清中的ET-1、IL-2、IL-6、TNF-ɑ水平均明显下降,差异有统计学意义(P<0.05);各剂量组之间相互比较,BALF及血清中的以上指标差异均有统计学意义(P<0.05),呈剂量依赖性趋势。高、中剂量组能够改善肺组织炎症情况;3)通过芦丁标准品和供试品在400-800nm波长范围内扫描,确定最大吸收波长(507nm),采用比色法,以以芦丁为标准品绘制标准曲线,求得回归方程为: Y=12.06x-0.003,R2=0.9999线性关系良好;方法学考察表明,含量测定方法稳定(RSD为0.71%)、准确性较高(RSD=1.63%);按照含量测定方法测定神香草药材总黄酮含量为2.68%,神香草乙酸乙酯部位总黄酮含量达到46.5%;以总黄酮的含量为指标,采用L9(34)正交试验,确定最佳提取条件为8倍量的70%的乙醇提取3次,每次1h;采用L9(34)正交试验,以总黄酮的含量为指标,确定AB-8树脂对神香草总黄酮的最佳分离纯化工艺为样品液浓度15mg/mL、乙醇浓度为70%、流速10mL/min时,分离纯化的总黄酮含量达到66.7%;与模型组比较,神香草总黄酮具有显著的抗炎、止咳、祛痰作用(P<0.05);与模型组相比,神香草总黄酮各剂量组大鼠BALF中细胞总数、Ly、Eos、Neu百分比、TGF-β1水平及肺组织TGF-β1水平均明显下降(P<0.05);各剂量组能够改善肺组织炎症情况;4)采用水蒸气蒸馏法提取神香草挥发油,含量达到0.68%。GC-MS分析,鉴定出65种化合物,检出物为总量的100%(以面积归一化法计算),其中含量较高的是亚油酸(13.83%)、棕榈酸(13.80%)、(+)-胡薄荷酮(8.31%)、(+)斯巴醇(6.27%)、二十一烷(5.34%)、香茅酸(4.07%);采用L9(34)正交试验,确定神香草挥发油超临界萃取最佳条件为20Pa压力,35℃,流量2L/min,萃取1.5h,携带剂量为75%(无水乙醇:药材比例=75ml:100g),含量达到5.5%。GC-MS分析,鉴定出34种化合物,其中γ-谷甾醇(31.882%)、二十一烷(19.953%)、亚麻酸(16.279%)、三十六烷(15.939%)、棕榈酸(13.80%)、亚麻酸乙酯(8.766%)等化合物含量较高;与模型组比较,神香草挥发油具有显著的抗炎、止咳、祛痰作用(P<0.05);与模型组相比,神香草挥发油各剂量组大鼠BALF中细胞总数、Ly、Eos、Neu百分比、TGF-β1水平及肺组织TGF-β1水平均明显下降(P<0.05);各剂量组能够改善肺组织炎症情况。 结论:神香草水、醇、乙酸乙酯萃取物及总黄酮、挥发油均具有显著的抗炎、止咳、祛痰、平喘作用。神香草乙酸乙酯萃取部位作用与其其抑制Eos、ET-1、IL-2、IL-6、TNF-ɑ水平有关。神香草总黄酮及挥发油作用主要与抑制Eos、TFG-β1水平有关。推测,神香草总黄酮及挥发油可能是神香草抗炎、止咳、祛痰作用的主要物质基础。