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目的:20世纪中期,瑞典科学家Branemark教授提出的骨结合理论为口腔种植学奠定了理论基础,使得口腔种植学飞速发展,从而使种植修复大量应用于临床,逐渐成为修复牙缺失的首选方法。学者们尝试采用不同材料、不同结构设计的种植体及对种植体表面进行处理来增加种植体的骨结合,而粗化处理是目前主流的种植体表面处理方法。作为当前技术最成熟的处理方法,经过此种方法处理后的种植体,可促进成骨细胞的粘附,加速骨整合。但目前种植修复仍存在一定的失败率,其中种植体周围炎被视为众多导致种植失败因素中一项重要因素[13-18],而种植体植入后细菌在其表面的粘附对种植体周围炎的发生至关重要。细菌的粘附增加了菌斑形成的机率,进而增加了种植体周围炎的发生机率 而粗化处理过的种植体表面,影响种植体植入后细菌在种植体表面的黏附、增殖。相比于纯钛种植体已在临床应用多年,近年来新兴的陶瓷氧化锆以其优良的性能,成为口腔种植的研究热点。本文选用氧化锆及纯钛两种材料,采用喷砂-双酸洗处理材料表面,扫描电镜检测材料表面形貌,能谱分析分析材料表面元素,然后在种植材料上接种培养牙龈卟啉单胞菌及中间型普氏菌,利用菌落形成单位计数、扫描电镜、MTT法及结晶紫染色法观察不同材料表面上的细菌粘附、增殖情况,探索不同种植材料及不同表面处理方法对两种细菌粘附的影响,为氧化锆陶瓷材料做为口腔种植植入材料的进一步应用提供理论依据。方法:1氧化锆片、纯钛片制备制备46片直径为19mm、厚度为1.0mm的氧化锆片;制备46片直径为19mm、厚度为1.0mm的纯钛片。2实验分组按照表面不同处理方法分为以下四组:A组:氧化锆表面粗化组,每组18片,Al2O3砂粒喷砂-HF/HN03混合液双重酸洗组。B组:氧化锆表面光滑组,每组18片。C组:纯钛表面粗化组,每组18片,Ti02砂粒喷砂-HCl/H2SO4混合液双重酸洗组。D组:纯钛表面光滑组,每组18片。3材料表面粗糙度检测采用单纯随机方法自各组中选取纯氧化锆及纯钛试件各3枚,再在各组试件表面随机选取3个位点利用TR200粗糙度仪测量粗糙度,求取各组所有位点测得的粗糙度平均值记录作为各组氧化锆片、纯钛片表面粗糙度。4扫描电镜观察各组试件表面形貌选取的各组纯钛片及氧化锆片经粘结、镀金后,扫描电镜观察各样本表面形貌。5 X线能谱分析仪对各试件表面进行元素分析各组氧化锆片、纯钛片经粘结后,X线能谱分析仪对各样本表面进行元素检测。6细菌复苏、活化标准菌株解冻,将牙龈卟啉单胞菌,中间普氏菌分别接种于布氏琼脂培养基,于厌氧培养箱中含10%CO2、10%H2,80%N2,37 ℃培养48h。光学显微镜下对细菌进行观察,以检查出纯正连续传代至第三代无杂菌的菌种作为实验用菌种。7细菌粘附将牙龈卟啉单胞菌,中间普氏菌分别接种到各组的试件表面。8菌落形成单位计数法计算材料表面的细菌数量在培养时间分别为24h、72h、120h时,PBS液洗脱未附着于钛片上的细菌,随后通过超声振动获得钛片上的细菌悬液,快速吸取10μL菌液用倍比稀释法稀释（稀释倍数为1:103）,快速吸取其中混合均匀的菌液50μ铺于强化布氏琼脂固体培养基表面,涂布均匀后放入厌氧环境中培养120h,根据菌落数及稀释倍数,计算细菌数目。9 MTT法检测各类材料表面的细菌数量将两种细菌分别接种24h、72h、120h,随机取出A,B两组接种细菌的氧化锆片和C,D两组接种细菌的纯钛片各6枚,MTT法检测各组样本表面细菌在550nm处的吸光度（OD）值。每组设立三个平行组。10结晶紫染色法检测各类材料表面的细菌数量将两种细菌分别接种24h、72h、120h,随机取出A,B两组接种细菌的氧化锆片和C,D两组接种细菌的纯钛片各6枚,1%戊二醛固定后利用结晶紫染色,33%醋酸脱色后,检测各组样本表面细菌在590nm处的吸光度（OD）值。每组设立三个平行组。11扫描电镜检测各类材料表面的细菌数量在培养时间分别为24h、72h、120h时,PBS液冲洗后,1%戊二醛固定,乙醇梯度脱水,临界点干燥,离子镀膜仪喷金,扫描电镜观察各试件表面细菌粘附情况。12统计学分析采用SPSS21.0软件进行统计分析。菌落计数法、MTT比色法、结晶紫染色法采用完全随机设计资料方差分析,组间比较采用SNK-q检验,数据资料用（?）±s表示。检验水平α=0.05,P<0.05为差异有统计学意义。结果:1表面粗糙检测A 组:0.65±0.23μm;B 组:0.45±0.05μm;C 组:2.14±0.24m;D组:0.68±0.15μm。2扫描电镜检测材料表面形貌A组,100目Al2O3喷砂-双重酸洗氧化锆片:表面形成大小约0.2～10μm左右的窝洞,以大小均匀的0.2～0.8μm左右的窝洞为主。B组,光滑氧化锆片:表面可见浅显的条纹状结构。C组,80目Ti02砂粒喷砂-双重酸洗纯钛片:表面形成大小约10～20μm的一级窝洞及1～5μm的二级窝洞。D组,光滑纯钛片:表面可见明显的条纹状结构。3 X线能谱分析仪对各样本表面进行元素分析A组、B组种植体表面均为Ti元素,Ti元素的含量均大于99.50%。C组、D组种植体表面为Zr及O元素,两种元素含量均大于99.50%。4菌落形成单位计数法计算材料表面的细菌数量1)各组样本表面两种细菌接种培养24h,72h,120h培养板上细菌数量平均值分别为:1-1)牙龈卟啉单胞菌（ATCC33277）24h,A(10-3):45.33±9.48,B(10-3):27.83±7.08,C(10-3):31.83± 10.61,D(10-3):21.67±5.4672h,A(10-3):90.67± 6.47,B(10-3):78.50±6.80,C(10-3):93.67± 11.76,D(10-3):66.5±9.65120h,A(10-3):241.33±32.83,B(10-3):202.33±20.55,C(10-3):273.83±32.05,D(10-3):208.17±19.771-2)中间普氏菌（ATCC 15033）24h,A(10-3):38.67± 13.19,B(10-3):29.5± 14.04,C(10-3):58.83± 11.86,D(10-3):25.33± 11.3172h,A(10-3):96.83±14.88,B(10-3):56.33±25.01,C(10-3):96.5± 18.00,D(10-3):58.67± 15.24120h,A(10-3):406.83±45.81,B(10-3):145.33±37.33,C(10-3):323.67±43.80,D(10-3):183.17±20.80不同时间点时,各组组内均有统计学差异（P<0.05）。2)各组相同时间点组间比较:2-1)牙龈卟啉单胞菌（ATCC 33277）24h时,粗糙氧化锆组菌落数量较光滑氧化锆组及光滑纯钛组多,较粗糙纯钛组数量少;粗糙纯钛组菌落数量较光滑纯钛组多,A组与B组、A组与C组、A组与D组、C组与D组的菌落数量差异有统计学意义（P<0.05）。光滑氧化锆组（B组）菌落数量和粗糙纯钛组（C组）,与光滑纯钛组（D组）的菌落数量差异没有统计学意义（P>0.05）,但B组较C组及D组菌落数量均数少。72h时,粗糙氧化锆组菌落数量较光滑氧化锆组及光滑纯钛组多;光滑氧化锆组菌落数量较粗糙纯钛组及光滑纯钛组少;粗糙纯钛组菌落数量较光滑纯钛组多,A组与B组、A组与D组、B组与C组、B组与D组、C组与D组的菌落数量差异有统计学意义（P<0.05）。粗糙氧化锆组（A组）和粗糙纯钛组（C组）菌落数量差异没有统计学意义（P>0.05）,但A组较C组菌落数量均数少。120h时,粗糙氧化锆组菌落数量较光滑氧化锆组及光滑纯钛组多,较粗糙纯钛组数量少;光滑氧化锆组较粗糙纯钛组数量少;粗糙纯钛组菌落数量较光滑纯钛组多,A组与B组、A组与C组、A组与D组、B组与C组、C组与D组的菌落数量差异有统计学意义（P<0.05）。光滑氧化锆组（B组）和光滑纯钛组（D组）的菌落数量差异没有统计学意义（P>0.05）。但B组较D组菌落数量均数少。2-2)中间普氏菌（ATCC 15033）24h时,粗糙氧化锆组菌落数量较粗糙纯钛组少;光滑氧化锆组较粗糙纯钛组数量少;粗糙纯钛组菌落数量较光滑纯钛组多,A组与C组、B组与C组、C组与D组的菌落数量差异有统计学意义（P<0.05）。粗糙氧化锆组（A组）菌落数量与光滑氧化锆（B组）、光滑纯钛组（D组）;光滑氧化锆（B组）与光滑纯钛组（D组）菌落数量差异没有统计学意义（P>0.05）。但B组较A组、D组较A组、B组较D组菌落数量均数少。72h时,粗糙氧化锆组菌落数量较光滑氧化锆组及光滑纯钛组多;光滑氧化锆组菌落数量较粗糙纯钛组少;粗糙纯钛组菌落数量较光滑纯钛组多,A组与B组、A组与D组、B组与C组、C组与D组的菌落数量差异有统计学意义（P<0.05）。粗糙氧化锆组（A组）和粗糙纯钛组（C组）菌落数量,光滑氧化锆组（B组）和光滑纯钛组（D组）差异没有统计学意义（P>0.05）,但A组较C组,B组较D组菌落数量均数少。120h时,粗糙氧化锆组菌落数量较光滑氧化锆组及光滑纯钛组多,较粗糙纯钛组数量少;光滑氧化锆组较粗糙纯钛组数量少;粗糙纯钛组菌落数量较光滑纯钛组多,A组与B组、A组与C组、A组与D组、B组与C组、C组与D组的菌落数量差异有统计学意义（P<0.05）。光滑氧化锆组（B组）和光滑纯钛组（D组）的菌落数量差异没有统计学意义（P>0.05）。但B组较D组菌落数量均数少。5 MTT法检测各类材料表面的细菌数量1)各组样本表面细菌接种培养24h,72h,120h后的吸光度值分别为:1-1)牙龈卟啉单胞菌（ATCC 33277）24h,A:0.628±0.09,B:0.184±0.01,C:0.77±0.15,D:0.22±0.02;72h,A:1.08±0.10,B:0.61 ±0.10,C:1.17±0.12,D:0.89±0.24;120h,A:2.02±0.51,B:1.07±0.20,C:2.26±0.03,D:1.69±0.62。1-2)中间普氏菌（ATCC 15033）24h,A:0.62±0.15,B:0.19±0.04,C:0.85±0.18,D:0.22±0.02;72h,A:0.95±0.13,B:0.69±0.09,C:1.24±0.02,D:0.72±0.11;120h,A:1.92±0.12,B:1.15±0.06,C:2.18±0.05,D:1.35±0.17。不同时间点时,各组组内均有统计学差异（P<0.05）。2)各组相同时间点组间比较:2-1)牙龈卟啉单胞菌（ATCC 33277）24h时:粗糙氧化锆组吸光度值较光滑氧化锆组及光滑纯钛组大;光滑氧化锆组吸光度值较粗糙纯钛组及光滑纯钛组小;粗糙纯钛组吸光度值较光滑纯钛组大,A组与B组、A组与D组、B组与C组、B组与D组、C组与D组的吸光度值有统计学意义（P<0.05）。粗糙氧化锆组（A组）和粗糙纯钛组（C组）吸光度值差异没有统计学意义（P>0.05）,但A组较C组吸光度值均数小。72h时,粗糙氧化锆组吸光度值较光滑氧化锆组及光滑纯钛组大;光滑氧化锆组吸光度值较粗糙纯钛组及光滑纯钛组小;粗糙纯钛组吸光度值较光滑纯钛组大,A组与B组、A组与D组、B组与C组、B组与D组、C组与D组的吸光度值有统计学意义（P<0.05）。粗糙氧化锆组（A组）和粗糙纯钛组（C组）吸光度值差异没有统计学意义（P>0.05）,但A组较C组细吸光度值均数小。120h时,粗糙氧化锆组吸光度值较光滑氧化锆组大;光滑氧化锆组较粗糙纯钛组数值小;粗糙纯钛组吸光度值较光滑纯钛组大,A组与B组、B组与C组、C组与D组的吸光度值差异有统计学意义（P<0.05）。粗糙氧化锆组（A组）吸光度值与粗糙纯钛组（B组）、光滑纯钛组（D组）;光滑氧化锆（B组）与光滑纯钛组（D组）吸光度值差异没有统计学意义（P>0.05）。但A组较C组、D组较A组、B组较D组吸光度值均数小。2-2)中间普氏菌（ATCC 15033）24h时:粗糙氧化锆组吸光度值较光滑氧化锆组及光滑纯钛组大;光滑氧化锆组吸光度值较粗糙纯钛组小;粗糙纯钛组吸光度值较光滑纯钛组大,A组与B组、A组与D组、B组与C组、C组与D组的吸光度值差异有统计学意义（P<0.05）。粗糙氧化锆组（A组）和粗糙纯钛组（C组）吸光度值,光滑氧化锆组（B组）和光滑纯钛组（D组）吸光度值差异没有统计学意义（P>0.05）,但A组较C组,B组较D组吸光度值均数小。72h时,粗糙氧化锆组吸光度值较光滑氧化锆组及光滑纯钛组大,较粗糙纯钛组小;光滑氧化锆组吸光度值较粗糙纯钛组小;粗糙纯钛组吸光度值较光滑纯钛组大,A组与B组、A组与C组、A组与D组、B组与C组、C组与D组的吸光度值差异有统计学意义（P<0.05）。光滑氧化锆组（B组）和光滑纯钛组（D组）的吸光度值差异没有统计学意义（P>0.05）。但B组较D组吸光度值均数小。120h时,粗糙氧化锆组吸光度值较光滑氧化锆组及光滑纯钛组大,较粗糙纯钛组小;光滑氧化锆组吸光度值较粗糙纯钛组小;粗糙纯钛组吸光度值较光滑纯钛组大,A组与B组、A组与C组、A组与D组、B组与C组、C组与D组的吸光度值差异有统计学意义（P<0.05）。光滑氧化锆组（B组）和光滑纯钛组（D组）的吸光度值差异没有统计学意义（P>0.05）。但B组较D组吸光度值均数小。6结晶紫染色法检测各类材料表面的细菌数量1)各组样本表面细菌接种培养24h,72h,120h后的吸光度值分别为:1-1)牙龈卟啉单胞菌（ATCC 33277）24h,A:1.34±0.07,B:0.59±0.04,C:1.38±0.32,D:1.07±0.15;72h,A:1.60±0.29,B:0.66±0.05,C:1.95±0.33,D:1.22±0.29;120h,A:1.92±0.44,B:1.07±0.15,C:2.13±0.25,D:1.29±0.08。1-2)中间普氏菌（ATCC 15033）24h,A:1.43±0.19,B:0.60±0.11,C:1.62±0.31,D:1.07±0.09;72h,A:1.95±0.08,B:0.73±0.08,C:2.10±0.14,D:1.24±0.22;120h,A:2.01 ±0.25,B:1.22±0.05,C:2.58±0.25,D:1.28±0.34。不同时间点时,各组组内均有统计学差异（P<0.05）。2)各组相同时间点组间比较:2-1)牙龈卟啉单胞菌（ATCC 33277）24h时:粗糙氧化锆组吸光度值较光滑氧化锆组及光滑纯钛组大;光滑氧化锆组吸光度值较光滑及粗糙纯钛组小,A组与B组、A组与D组、B组与C组、B组与D组的吸光度值异有统计学意义（P<0.05）。粗糙氧化锆组（A组）和粗糙纯钛组（C组）吸光度值,光滑纯钛组（D组）和粗糙纯钛组（C组）吸光度值差异没有统计学意义（P>0.05）,但A组较C组,D组较C组吸光度值均数小。72h时,粗糙氧化锆组吸光度值较光滑氧化锆组大;光滑氧化锆组吸光度值较粗糙纯钛、光滑纯钛组小,A组与B组、B组与C组、B组与D组的吸光度值异有统计学意义（p<0.05）。粗糙氧化锆组（A组）和粗糙纯钛组（C组）、光滑纯钛组（D）,光滑纯钛组（C）与粗糙纯钛组（D）吸光度值差异没有统计学意义（P>0.05）,但A组较C组、D组较A组、D组较C组吸光度值均数小。120h时,粗糙氧化锆组吸光度值较光滑氧化锆组及光滑纯钛组大;光滑氧化锆组吸光度值较粗糙纯钛组及光滑纯钛组小;粗糙纯钛组吸光度值较光滑纯钛组大,A组与B组、A组与D组、B组与C组、B组与D组、C组与D组的吸光度值有统计学意义（P<0.05）。粗糙氧化锆组（A组）和粗糙纯钛组（C组）吸光度值差异没有统计学意义（P>0.05）,但A组较C组吸光度值均数小。2-2)中间普氏菌（ATCC 15033）241h时:粗糙氧化锆组吸光度值较光滑氧化锆组及光滑纯钛组大;光滑氧化锆组吸光度值较粗糙纯钛组及光滑纯钛组小;粗糙纯钛组吸光度值较光滑纯钛组大,A组与B组、A组与D组、B组与C组、B组与D组、C组与D组的吸光度值有统计学意义（P<0.05）。粗糙氧化锆组（A组）和粗糙纯钛组（C组）吸光度值差异没有统计学意义（P>0.05）,但A组较C组吸光度值均数小。72h时,粗糙氧化锆组吸光度值较光滑氧化锆组及光滑纯钛组大;光滑氧化锆组吸光度值较粗糙纯钛组及光滑纯钛组小;粗糙纯钛组吸光度值较光滑纯钛组大,A组与B组、A组与D组、B组与C组、B组与D组、C组与D组的吸光度值有统计学意义（P<0.05）。粗糙氧化锆组（A组）和粗糙纯钛组（C组）吸光度值差异没有统计学意义（P>0.05）,但A组较C组吸光度值均数小。120h时,粗糙氧化锆组吸光度值较光滑氧化锆组及光滑纯钛组大,较粗糙纯钛组小;光滑氧化锆组吸光度值较粗糙纯钛组小;粗糙纯钛组吸光度值较光滑纯钛组大,A组与B组、A组与C组、A组与D组、B组与C组、C组与D组的吸光度值差异有统计学意义（P<0.05）。光滑氧化锆组（B组）和光滑纯钛组（D组）的吸光度值差异没有统计学意义（P>0.05）。但B组较D组吸光度值均数小。7扫描电镜检测各类材料表面的细菌数量24h时牙卟啉单胞菌及中间普氏菌在两种材料表面粘附较少,细菌分布散在;72h及120h时,光滑氧化锆及粗糙纯钛组数量多且密集,粗糙表面细菌数量均呈几何式生长,细菌聚集成团,呈大面积多层次生长。结论:1氧化锆及纯钛材料表面经粗化处理后增加了牙龈卟啉单胞菌、中间普世菌在材料表面的粘附。2氧化锆相对于纯钛,具有减少牙龈卟啉单胞菌、中间普世菌粘附的特性。3经粗化处理后的氧化锆表面虽粗糙度低于纯钛表面,但其表面形貌的改变增加了牙龈卟啉单胞菌、中间普世菌在材料表面的粘附。