论文部分内容阅读
目的:观察心肌细胞缺氯/复氯处理后是否引起细胞损伤及其AEs和CLCs蛋白的表达。方法:SD新生大鼠(1～3 d),雌雄不拘,无菌取出心脏,分离附着组织,胰蛋白酶消化,纯化制成心肌细胞;培养第4 d随机分为2组:正常对照(Control)组、缺氯/复氯组。分别观察:①心肌细胞搏动频率;②细胞存活率(MTT法);③培养液LDH的活性;④RT-PCR法检测细胞中AEs和CLCs的mRNA含量;⑤Western Blotting法检测细胞中AEs蛋白的表达。结果:①细胞搏动频率:Control组(93±15 beats/min)与缺氯/复氯组(39±10 beats/min)相比有显著性差异(p<0.01);②细胞存活率:Control组(87.5±7.9%)与缺氯/复氯组(43.4±8.3%)相比有显著性差异(p<0.01);③LDH活性:Control组(3.31±0.56 IU/L)与缺氯/复氯组(29.60±1.69IU/L)相比有显著性差异(p<0.01);④CLCs及AEs mRNA含量变化:AE1、AE2、AE3和CLC-2、CLC-3、CLC-4、CLC-5、CLC-6、CLC-7在正常心肌细胞中有基础表达;AE2、CLC-2和CLC-4 mRNA缺氯/复氯组与Control组相比无显著性差异(p>0.05);经缺氯/复氯处理后,AE1和AE3 mRNA明显上调(p<0.01),CLC-3、CLC-5、CLC-6、CLC-7 mRNA明显下调(p<0.01);⑤AEs蛋白表达变化:AEs蛋白表达与AEs mRNA表达变化基本一致,AE1和AE3经缺氯/复氯处理后组明显上调(p <0.01),而AE2蛋白表达在二组间无显著性差异(p>0.05)。结论:心肌细胞经缺氯/复氯处理,可导致细胞损伤,AEs和CLCs蛋白的部分亚型可能参与了其损伤过程。