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为了解当今规模猪场大肠杆菌的药物敏感性、耐药与药物使用的相关性以及细菌的耐药基因携带情况,本研究从规模猪场分离猪源大肠杆菌,进行了以下相关试验：1.从8个猪场采集不同胎龄母猪的肛门拭子,利用麦康凯平板和PCR方法分离和鉴定到大肠杆菌330株,利用K-B法检测各猪场采集的猪源大肠杆菌对5类抗生素(四环素类、磺胺类、氨基糖苷类、喹诺酮类、头孢类)中15种药物的耐药性,并对8个猪场临床用药情况进行了详细调查。最后将药敏结果与猪场用药情况相结合进行分析。结果显示：8个猪场的大肠杆菌对5类抗生素中的低代次品种(链霉素、头孢噻吩、四环素、氧氟沙星、磺胺甲基异恶唑)均已形成了很强的耐药性；对于头孢类、氨基糖苷类、喹诺酮类抗生素中的高代次药物(阿米卡星、头孢他啶、左氧氟沙星)的耐药性较低、但也有部分大肠杆菌菌株出现了耐药性；对于四环素类药物和磺胺类药物,原本高效的部分品种也基本上失去了对分离大肠杆菌的抑菌效果；同一猪场内来自不同胎次母猪的大肠杆菌药物敏感性没有明显差异。结果分析表明：猪场内抗生素的使用,一方面杀灭了大量对抗生素敏感的大肠杆菌,使耐药的菌株得到了快速生长,另一方面加速了敏感大肠杆菌菌株获得性耐药特性的形成,尤其是在饲料中添加抗生素更容易加速细菌耐药程度的增加,且这一现象在同一猪场不同胎龄母猪分离菌之间没有差异。猪场用药与猪场细菌的耐药存在一定的相关性。2.根据药敏表型结果,合成耐药率偏高的氨基糖苷类、四环素类、磺胺类三类抗生素相关的耐药基因引物,对所有存在耐药表型的细菌进行耐药基因的PCR检测。结果显示：对于每一株耐药菌,基本上都能检测到一种耐药基因,氨基糖苷类抗生素耐药基因检出率为59.3%,四环素类抗生素耐药基因检出率为94.1%,磺胺类抗生素耐药基因检出率为74.9%有些细菌甚至能够检测到多种耐药基因,1株细菌检测到多种耐药基因的比率为16.5%。分别从来自不同猪场的大肠杆菌中挑选出一株相应耐药基因阳性的细菌,用PCR方法扩增出磺胺类耐药基因Su12、四环素类耐药基因tet(A)、氨基糖苷类耐药基因ant(3,,)-Ia,并进行测序。然后对不同猪场来源细菌所扩增出的同种耐药基因进行序列比对。结果发现来自不同猪场大肠杆菌的同一类耐药基因之间同源性在98%以上,即各类耐药基因序列在不同菌株间的变异性非常小。