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帕金森病（Parkinson’s disease,PD）是一种常见的神经退行性疾病,临床表现为运动迟缓、强直和静止性震颤等运动障碍,其病理特征主要为路易小体（Lewy bodies,LBs）的形成,以及黑质（Substantia nigra,SN）多巴胺能（Dopamine,DA）神经元的丢失。环状RNA（Circular RNA,circ RNA）作为一类新兴的非编码RNA,在神经系统中表达丰富,广泛参与了神经系统疾病的发生发展过程中,但circ RNAs在PD中的具体功能及调控机制仍有待进一步研究。本课题组早期研究发现,在细胞中敲低circ-Pank1可以减少α-syn的表达,而α-syn的错误折叠聚集是PD病理改变的重要标志。由此我们推测circ-Pank1可能在PD模型小鼠运动障碍中有重要作用。目的:本实验旨在研究circ-Pank1在PD模型小鼠中的表达变化及可能的作用机制,以期为今后PD的治疗提供新的思路和实验依据。方法:1.构建PD模型小鼠,观察circ-Pank1的表达变化。雄性ICR小鼠（25-30g,3-4月龄）随机分成2组:对照组（Veh组）、鱼藤酮给药组（Rot组）,每组8只,Rot组小鼠按30mg/kg/day灌胃给药,连续给药28天,Veh组给予同等剂量的溶剂溶液。给药28天后,应用旷场实验、爬杆实验、步距测量的方法,观察PD模型小鼠运动能力的变化;采用免疫组织化学、Western Blot等技术,检测PD模型小鼠黑质区酪氨酸羟化酶（Tyrosine hydroxylase,TH）、α-syn及其寡聚体的表达变化;采用q RT-PCR技术,检测PD模型小鼠黑质区circ-Pank1的表达变化。2.黑质区敲低circ-Pank1对PD模型小鼠运动能力的影响。将PD模型小鼠随机分为2组:PD模型小鼠+GFP腺相关病毒对照组（Rot+AAV-GFP组）和PD模型小鼠+敲低circ-Pank1腺相关病毒组（Rot+AAV-sh-circ-Pank1组）,每组8只。联合使用脑立体定位注射的方法,将特异性敲低circ-Pank1的腺相关病毒载体（AAV-sh-circ-Pank1）和对照GFP的腺相关病毒载体（AAV-GFP）分别注射入PD模型小鼠的黑质区。采用q RT-PCR技术,检测circ-Pank1的敲低效率。通过旷场实验、爬杆实验、步距测量的方法,检测Rot+AAV-GFP组小鼠和Rot+AAV-sh-circ-Pank1组小鼠的运动能力的变化。3.敲低circ-Pank1后,PD模型小鼠黑质区TH、α-syn及其寡聚体的表达变化。采用免疫组织化学技术,检测Rot+AAV-GFP组和Rot+AAV-sh-circ-Pank1组小鼠黑质区TH和寡聚体表达的变化;Western Blot和Dlot Blot技术,检测TH、α-syn及其寡聚体的蛋白表达变化。结果:1.PD模型小鼠黑质区circ-Pank1的表达升高。旷场实验结果显示,与Veh组相比,Rot组小鼠中心区域停留时间、总路程、平均速度均减少;爬杆实验结果显示,Rot组小鼠爬杆全长所用时间与Veh组相比增加;步距测量结果显示Rot组小鼠前爪及后爪步距与Veh组相比均缩短。免疫组织化学结果显示,与Veh组相比,Rot组小鼠黑质区TH表达减少,寡聚体表达增多;Western Blot和Dlot Blot结果显示,与Veh组相比,Rot组小鼠黑质区TH蛋白表达降低,α-syn的蛋白表达升高,寡聚体表达升高。q RT-PCR结果显示,Rot组小黑质区circ-Pank1的表达与Veh组相比显著升高。2.黑质区注射AAV-sh-circ-Pank1可改善PD模型小鼠的运动功能障碍。脑立体定位将AAV-sh-circ-Pank1注射入黑质区后,q RT-PCR检测结果显示,与Rot+AAV-GFP组相比,Rot+AAV-sh-circ-Pank1组小鼠黑质区circ-Pank1的表达量显著降低。旷场实验结果显示,与Rot+AAV-GFP组相比,Rot+AAV-sh-circ-Pank1组小鼠中心区域停留时间无变化、总路程增加、平均速度增高;爬杆实验结果显示,Rot+AAV-sh-circ-Pank1组小鼠爬杆全长所用时间与Rot+AAV-GFP组相比减少;步距测量结果显示,Rot+AAV-sh-circ-Pank1组,与Rot+AAV-GFP组相比小鼠前爪步距增加但后爪步距无变化。3.黑质区注射AAV-sh-circ-Pank1后,PD模型小鼠TH表达升高,α-syn及其寡聚体表达降低。免疫组织化学结果显示,与Rot+AAV-GFP组相比,Rot+AAV-sh-circ-Pank1组小鼠黑质区TH表达增多,寡聚体表达降低;Western Blot和Dlot Blot结果显示,与Rot+AAV-GFP组相比,Rot+AAV-sh-circ-Pank1组小鼠黑质区TH的蛋白表达升高,α-syn及其寡聚体的蛋白表达降低。结论:1.PD模型小鼠黑质区circ-Pank1表达升高。2.敲低黑质区circ-Pank1可改善PD模型小鼠的运动功能障碍。3.PD模型小鼠黑质区敲低circ-Pank1可使TH的表达升高,α-syn及其寡聚体的表达降低。