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目的:运用网络药理学研究方法预测穿山龙的活性成分、作用靶点和信号通路,探讨穿山龙治疗PDPN的作用机制,为下一步动物实验奠定理论基础;根据预测结果,选择穿山龙中的主要活性成分薯蓣皂苷进行动物实验,深入研究薯蓣皂苷对PDPN小鼠坐骨神经p-JAK2和p-STAT3蛋白表达的影响,以进一步探讨穿山龙提取物薯蓣皂苷治疗PDPN的作用机制,从而为中医药防治PDPN提供新的手段。材料与方法:1.网络药理学研究检索中药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP)和台湾中医药资料(TCM Database@taiwan),并参考国内外文献,收集穿山龙的化学成分信息。按照Lipinski类药性五规则并结合文献报道,筛选出穿山龙的活性成分。利用Pharm Mapper数据库和Genecards数据库预测并筛选出穿山龙治疗PDPN的潜在靶点;通过DAVID 6.8数据库对获得的靶点蛋白进行KEGG通路注释;采用String 10.5数据库和Cytoscape 3.5.1软件绘制“活性成分-靶点-信号通路”网络图和“蛋白质-蛋白质相互作用”网络图。2.动物实验选择体重为20-25g的SPF级雄性C57BL/6小鼠83只,适应性喂养一周后,随机选取12只为正常对照组,其余小鼠通过腹腔内连续两日注射1%链脲佐菌素溶液(Streptozotocin,STZ)70mg/kg(用PH4.2,0.1mol/L的枸椽酸缓冲液配制)诱导PDPN模型。成模后按随机数字表法,将小鼠分成4组,每组12只,分别为模型组、薯蓣皂苷高剂量组、薯蓣皂苷低剂量组和α-硫辛酸组。观察给药前0周和给药后2周、4周、6周、8周小鼠行为特征、血糖值、体重,检测给药前0周和给药后4周、8周机械痛阈值和热痛阈值,8周时采用Western Blot技术检测小鼠坐骨神经p-JAK2和p-STAT3蛋白表达。结果:1.穿山龙治疗PDPN网络药理学研究穿山龙27个活性成分可通过调控SRC、PIK3R1、STAT1、MAPK1、JAK2、IGF1、IL2等靶点,干预PI3K/AKT信号通路、MAPK信号通路、VEGF信号通路、TLRS信号通路、JAK/STAT信号通路、PPAR信号通路等相关信号通路,发挥治疗PDPN的作用。2.动物实验研究2.1.模型组与各治疗组小鼠均出现精神萎靡不振,动作迟钝,反应能力差,倦怠嗜卧,蜷卧拱背,摄食及尿量增加,毛色枯萎无光泽,其中以模型组症状最重,并随着时间推移而逐渐加重,各治疗组在给药2周、4周、6周、8周后,上述症状较模型组有明显改善。2.2.模型组和治疗组较正常对照组小鼠血糖水平有明显的升高(P<0.01);2周、4周、6周、8周时各治疗组较模型组小鼠血糖水平有明显改善(P<0.01);8周时薯蓣皂苷高剂量组小鼠血糖水平降低最明显(P<0.01)。2.3.模型组和治疗组较正常对照组小鼠体重水平有明显的减轻(P<0.01),随着病程的延长,模型组小鼠体重不断下降,4周、6周、8周时各治疗组与同期模型组相比较小鼠的体重明显增加(P<0.01)。2.4.模型组、各治疗组与正常对照组相比小鼠的机械痛阈值明显降低(P<0.01);4周、8周时各治疗组与模型组相比小鼠的机械痛阈值明显升高(P<0.01),8周时薯蓣皂苷高剂量组与薯蓣皂苷低剂量组相比小鼠的机械痛阈值明显升高(P<0.05)。2.5.模型组、各治疗组与正常组小鼠相比热痛阈值明显下降(P<0.01);4周、8周时各治疗组与模型组相比小鼠的热痛阈值明显升高(P<0.01),薯蓣皂苷高剂量组与低剂量组相比小鼠的热痛阈明显升高(P<0.05)。2.6.模型组、各治疗组与正常组小鼠相比坐骨神经p-JAK2蛋白表达量显著增加(P<0.05),其中模型组表达量在其余四组中最大(P<0.01);薯蓣皂苷低剂量组、薯蓣皂苷高剂量组与模型组小鼠相比坐骨神经p-JAK2蛋白表达量明显下降,其中薯蓣皂苷高剂量组下降最明显(P<0.01)。与正常组相比,模型组小鼠坐骨神经p-STAT3蛋白表达量显著增加(P<0.01),各治疗组小鼠坐骨神经p-STAT3蛋白表达量略有升高,但结果无统计学意义;与模型组相比,薯蓣皂苷低剂量组小鼠坐骨神经p-STAT3蛋白表达量下降,但结果无统计学意义,薯蓣皂苷高剂量组及α-硫辛酸组小鼠坐骨神经p-STAT3蛋白表达量明显下降(P<0.01)。结论:1.穿山龙27个活性成分可通过参与炎症、免疫、氧化应激等过程来发挥治疗PDPN的作用。2.穿山龙提取物薯蓣皂苷可下调PDPN小鼠坐骨神经p-JAK2、p-STAT3蛋白表达,提高热痛阈值和机械痛阈值,从而延缓神经损伤的进程。