意大利蜜蜂(Apis mellifera L.)工蜂幼虫表皮E-β-罗勒烯含量测定与相关合成基因表达研究

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蜜蜂幼虫信息素是重要的化学通讯物质,其主要组分是10种酯类物质。近年来,众多研究发现一种重要的蜜蜂幼虫信息素组分—E-β-罗勒烯,它不仅能够抑制蜜蜂工蜂的卵巢成熟,还参与调节工蜂的采粉行为,提高蜂群中采粉蜂的比例,推迟采集蜂的第一次采集日龄。尽管对于蜜蜂幼虫E-β-罗勒烯的研究已较为系统,但不同日龄工蜂幼虫体表E-β-罗勒烯的含量尚不明确,且目前与E-β-罗勒烯分泌相关的基因表达的研究还比较缺乏。本研究运用GC-MS/MS,对意大利蜜蜂2-6日龄的工蜂幼虫体表E-β-罗勒烯的含量进行测定,揭示不同日龄的工蜂幼虫体表E-β-罗勒烯的含量差异;运用qPCR技术,研究相关合成基因在各日龄幼虫体内表达的差异性。具体结果如下:第一部分,运用气相色谱-三重四级杆质谱联用仪(GC-MS/MS),测定工蜂幼虫表皮E-β-罗勒烯的含量。由结果可知,不同日龄的工蜂幼虫体表E-β-罗勒烯的含量差异极显著(P<0.01),随蜜蜂幼虫日龄的增大而变化,2至4日龄为E-β-罗勒烯的含量增长阶段,在4日龄达最大值(2.25μg/只);在4至6日龄期间E-β-罗勒烯的含量逐渐减少。随幼虫日龄的增长其体重呈指数型上升,相对于对应日龄的体重而言,小幼虫(2-4日龄)阶段其体表E-β-罗勒烯的相对含量较高,大幼虫(5-6日龄)阶段其相对含量较低。第二部分,利用实时荧光定量技术(qPCR)对2至6日龄意大利蜜蜂幼虫体内E-β-罗勒烯相关合成基因的表达进行检测。结果表明,基因3-har、mk-like、pk-like和fps在不同日龄幼虫间的相对表达量差异并不显著(P>0.05)。基因aaatc-like、md、llp-lke、at1和hs1的相对表达量因日龄的不同而存在差异(P<0.05)。基因aatc-like、ma、llp-like和at1在6日龄幼虫中相对表达量上调,这可能与该时期幼虫正进入封盖期有关。
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