【摘 要】
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在前期工作中,本实验室从水稻数据库中筛选出50个种子特异性优势表达候选基因,确定了一个胚乳特异性强表达基因(暂名OsLatex-1)。初步分析表明,OsLatex-1启动子具有胚乳特异
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在前期工作中,本实验室从水稻数据库中筛选出50个种子特异性优势表达候选基因,确定了一个胚乳特异性强表达基因(暂名OsLatex-1)。初步分析表明,OsLatex-1启动子具有胚乳特异性表达特性。本研究进一步从NCBI水稻数据库中搜索出一个与OsLatex-1高度同源基因(暂名OsLatex-2),其CDS序列相似度为95%。通过PCR克隆了 OsLatex-1和OsLatex-2上游启动子(～2kb),分别命名pOsLatex-1、pOsLatex-2。构建启动子与报告基因gus融合表达载体并转化至水稻中,转基因植株经组织化学染色和Gus酶活测定,其转基因植株的胚乳中均能被检测到gus基因的表达,而在根、茎、叶和颖花中检测不到表达,研究表明OsLatex-1、OsLatex-2启动子是均是胚乳特异性启动子。通过OsLatex-1启动子(pOsLatex-1)5’端截短实验结合plantcare和PLACE数据库分析启动子的功能元件,结果发现在-1055～845区间含有Prolamin和-300core框,其可能是导致Gus酶活降低的关键元件;而在-325～-173区间存在胚乳特异性表达必需的保守序列,该区间存在02site、GCN4。同时,实验利用5’ RACE实验确定了 OsLatex-1、OsLatex-2启动子转录起始位点,为进一步研究启动子和基因的功能提供了帮助。NCBI数据库中OsLatex-1、OsLatex-2还未注释过,只是推测其是PYR/PYL/RCAR家族成员,可能参与与ABA调控。为研究该基因的功能,本研究构建了 OsLatex-1、OsLatex-2过表达载体及RNAi载体并进行水稻遗传转化。对转基因植株T1代种子萌发初步实验发现,以0.25mg/LABA处理时,对照组及过表达组根的生长明显受到抑制,而RNAi组根的生长基本正常,表明OsLatex可能参与ABA信号调控。这一结果为进一步研究OsLatex基因功能奠定了基础。
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