论文部分内容阅读
补体系统作为固有免疫的组成部分和免疫效应系统,在无脊椎动物防御过程中发挥了重要作用。但目前对无脊椎动物补体样系统的研究刚刚起步,对软体动物补体样成分的研究几近空白。本研究采用RACE、RT-PCR和基因原核重组表达等分子生物学技术开展了对栉孔扇贝(Chlamys farreri)含硫酯蛋白(thioester-containing protein, CfTEP)、含C1q结构域蛋白(C1 q-domain-containing protein, CfC1qDC)、C型凝集素(C-type lectin, Cflec-3, Cflec-4和Cflec-5)和海湾扇贝(Argopecten irradians) C型凝集素(AiCTL-6)、纤维蛋白原相关蛋白(fibrinogen-related protein, AiFREP)等基因的克隆、表达和功能研究。CfTEP、CfC1qDC、Cflec-3、Cflec-4、Cflec-5、AiCTL-6和AiFREP的cDNA全长分别为4616、777、2256、2080、1412、1063和990 bp。它们的开放阅读框编码的蛋白均含有一段信号肽,并分别含有α2-巨球蛋白结构域、C1q结构域、三个或四个或一个C型凝集素结构域和纤维蛋白原样结构域。在健康扇贝中,CfTEP和Cflec-4仅在健康扇贝的肝胰腺和性腺中表达,而其它基因在各个检测组织中均有表达。鳗弧菌刺激可显著诱导这些基因的表达。CfTEP基因组DNA通过转录后选择性剪接可形成七种不同的转录本,它们在雌雄扇贝性腺中对不同细菌的刺激呈现出不同的表达模式。原核重组的CfC1qDC蛋白具有较强的脂多糖结合活性；重组的Cflec-3蛋白对施氏假单胞菌具有钙离子依赖的、甘露糖结合型的凝集作用；重组的Cflec-5蛋白对毕赤酵母具有钙离子非依赖的、甘露糖结合型的凝集作用；重组的AiCTL-6蛋白对大肠杆菌、藤黄微球菌和金黄色葡萄球菌具有钙离子依赖的凝集作用；重组的AiFREP蛋白对人、鸡血红细胞以及鳗弧菌、大肠杆菌和藤黄微球菌具有钙离子依赖的凝集活性,并且其凝血活性可被含乙酰基的糖类所抑制。本研究结果表明,CfTEP、CfC1qDC、Cflec-3、Cflec-4、Cflec-5、AiCTL-6和AiFREP作为扇贝固有免疫中重要的模式识别受体参与了扇贝对外源微生物刺激的响应。它们在分子结构和功能上与高等动物补体系统中的C3、C1q、甘露糖结合凝集素和ficolin等成分有一定相似性,有可能作为它们的一种原始形式存在于低等软体动物中。该研究结果为进一步描绘扇贝中存在的简单原始的补体系统及揭示补体系统的进化脉络提供了分子生物学证据,同时对深入了解扇贝免疫防御机制,丰富和发展海洋无脊椎动物免疫学内容也具有重要理论意义。