肝癌是全世界范围内最为常见的十大癌症之一,在我国的第二大恶性肿瘤。目前研究表明,肿瘤的生长、增殖和分化程度与其细胞的凋亡水平相关,因此,在癌症的防治中,诱导癌细胞凋亡已成为一个重要的策略,同时,在天然产物中寻找具有良好抑癌作用的物质,对于肝癌的防治尤为重要。茶叶是世界三大饮料之一,而我国又是茶叶生产大国,茶叶在我国栽培历史悠久、种植范围广、从古至今一直受到人们的青睐,其主要活性成分具有抗氧化、抗病毒和抗菌等诸多功能效果。不同茶类的防癌抗癌作用更加受到关注,由于茶叶加工工艺不同,产地不同,品种及种类繁多,特别是加工工艺不同与其成分变化密切相关,如绿茶、青茶、茯砖茶和红茶为常见四种典型茶类,分别代表了不发酵、半发酵和全发酵不同工艺,其成分差异和防癌抗癌活性有何关联尚未见报道。为此,本研究以绿茶、青茶、茯砖茶和红茶四种典型茶类为研究对象,对其主要活性成分进行定量分析,并从细胞水平探索其抗癌活性及诱导癌细胞途径和其分子机制。本研究以四大典型茶类提取物为研究对象,采用细胞体外试验,以人肝癌细胞HepG2为试验模型,试验中首先采用MTT法检测经不同浓度各受试物作用后HepG2细胞的存活率;其次运用倒置荧光显微镜和流式细胞仪观测经不同梯度各受试物作用后HepG2细胞形态、凋亡率、周期、活性氧和线粒体膜电位的变化;最后采用Western Blot蛋白免疫印迹法测定经不同梯度的受试物作用后HepG2细胞内凋亡相关蛋白 Bax/Bcl-2、Caspase-3、Caspase-9、Cyt-c、PARP 和 p53 的蛋白表达量变化。主要研究结果如下:1、绿茶、青茶、茯砖茶和红茶这四大类茶叶茶多酚含量测定结果表明,茶叶中总酚含量绿茶>青茶>茯砖茶>红茶;高效液相色谱分析结果得知绿茶和青茶中茶多酚单体主要以没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)为主,而茯砖茶和红茶中茶多酚单体主要以咖啡因(CAF)为主。2、该四大类茶提取物对HepG2细胞的增殖都具有显著地抑制效果,并具有剂量依赖性;四大类茶提取物均可使HepG2细胞形态出现皱缩、核浓染和细胞碎片等显著地凋亡特征;四大类茶提取物均可使HepG2细胞周期停滞,并诱导细胞调亡率显著增加。同时,由HepG2细胞存活率和凋亡率的测定结果可知,四大类茶提取物对HepG2细胞的增殖抑制效果强弱顺序为绿茶>青茶>茯砖茶>红茶。3、绿茶提取物对HepG2细胞凋亡通路的研究表明:经绿茶提取物作用后HepG2细胞线粒体膜电位显著下降;同时细胞内活性氧(ROS)水平显著增加。绿茶提取物作用后HepG2细胞内调亡相关蛋白p53、Cyt-c、Caspase-3、Caspase-9和Bax/Bcl-2比值的表达量均显著升高(P<0.01),并且PARP片段化增加,其活性降低。4、该四大类茶提取物抑制人肝癌细胞增殖的机制是通过阻滞细胞周期并促进细胞调亡率实现的,其中,绿茶提取物诱导人肝癌细胞凋亡的途径主要是线粒体调节的内源性凋亡通路。