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螺蛳(Bellamy a purificata)属于软体动物门(Mollusca)、腹足纲(Gastropoda)、前鳃亚纲(Prosobranchia)、田螺科(Vivipariidae),是一种体外裹着一层锥形或纺锤形硬壳的软体动物,它广泛分布于我国长江流域及广东等地。现有的糖生物学研究表明,贝类多糖具有抗肿瘤、调节免疫、抗病毒等多种功效,且毒副作用较小,受到广大专家学者的关注。本文从螺蛳腹足肌中提取分离多糖,并对纯化所得的单一多糖组分的结构和活性进行了研究,为螺蛳多糖的利用与开发提供参考。通过单因素试验和响应面分析法对螺蛳多糖的提取条件进行了优化,得到最佳提取工艺如下:料液比1:28(w/v),提取温度75℃,浸提时间5.2h。经苯酚-硫酸法测定最佳提取条件下的多糖得率为2.52%,该条件下所得多糖提取液冷冻干燥后得多糖粗品命名为CBPS。在分离纯化研究中,比较了三氯乙酸法、Sevag法、木瓜蛋白酶-Sevag法和胰蛋白酶-Sevag法等脱蛋白工艺的优劣,综合考虑蛋白质的去除率、多糖的损失率、试剂的消耗等因素,选择了先以胰蛋白酶酶解,然后以Sevag试剂反复脱蛋白4次的工艺流程。在此基础上进一步研究了透析、DEAE-sephacel离子交换柱层析和Sepharose 6B凝胶柱层析等纯化手段在分离纯化CBPS中的应用,最终确定将CBPS溶液用截留分子量为14kDa的透析袋对水透析,而后用DEAE-sephacel离子交换柱(1.6×40cm)和Sepharose 6B凝胶柱(1.6×120cm)进一步纯化,分级得到两个多糖组分,分别命名为BPS-1和BPS-2。经高效液相凝胶色谱和醋酸纤维素电泳分析表明BPS-1和BPS-2为单一组分。通过化学法对BPS-1和BPS-2的组成进行分析,结果表明BPS-1和BPS-2的总糖含量(以无水葡萄糖计)分别为99.14%和97.06%,其中葡萄糖醛酸含量分别为18.58%和17.87%,氨基葡萄糖含量分别为12.91%和18.98%,并且还含有少量的硫酸基,分别为2.13%和2.47%。完全酸水解-气相色谱分析表明BPS-1是以葡萄糖为主,微量的海藻糖、阿拉伯糖、木糖组成,其摩尔百分比为96.14%:1.71%:0.97%:1.18%;BPS-2是以葡萄糖为主,微量的海藻糖、阿·拉伯糖、木糖、甘露糖和半乳糖组成,其摩尔百分比为94.71%:1.98%:1.43%:0.58%:0.44%:0.86%。凝胶渗透色谱法测得BPS-1和BPS-2的分子量分别为7.2×106Da和8.3×106Da。红外光谱分析表明,组成BPS-1和BPS-2的单糖为吡喃糖,且以α-糖苷键连接。部分酸水解、高碘酸氧化、Smith降解、甲基化-气质分析、以及1H NMR 13C NMR分析表明,BPS-1的基本骨架由α-(1→4)糖苷键连接的葡萄糖构成,侧链为α-(1→3)糖苷键连接的葡萄糖和非还原末端残基,它们均通过α-(1→6)糖苷键与主链葡萄糖相连;BPS-2的基本骨架由α-(1→4)糖苷键连接的葡萄糖构成,两条支链则由α-(1→3)糖苷键连接的葡萄糖和非还原末端残基构成,它们分别通过α-(1→3)和α-(1→6)糖苷键与主链葡萄糖相连。BPS-1的基本结构为:BPS-2的基本结构为:通过鼠耳肿胀法抗炎实验表明BPS-1和BPS-2均具有抗炎活性,且在一定浓度范围内,与浓度呈正相关。在浓度范围0.05~1.0mg/ml内,BPS-1和BPS-2对鼠耳肿胀程度的抑制率分别在14.02~57.56%和11.07~56.46%之间,两者抗炎效果基本相同;纸片扩散法抑菌实验分析表明BPS-1和BPS-2仅对革兰氏阴性菌具有抑菌活性,且BPS-1的抑菌能力略高于BPS-2;体外抗氧化DPPH·清除实验表明BPS-1和BPS-2不具有显著的DPPH·清除能力;MTT法体外抗肿瘤活性测定表明,BPS-1和BPS-2体外抑制肝癌细胞HepG2增殖的活性不显著。