VEGFA、APP及NUMB基因及其选择性剪接单体与结直肠癌关系的实验研究

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目的:运用基因组学方法检测VEGFA、APP及NUMB mRNA和其选择性剪接单体在结直肠癌(colorectal cancer,CRC)组织中的表达情况,探索基因选择性剪接与结直肠癌的关系。方法:(1)运用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(real-time quantitativereverse transcriptase polymerase chain reaction, real-time qRT-PCR)分别检测20对结直肠癌及相应正常肠黏膜组织中VEGFA、APP及NUMB mRNA的表达情况,探讨其与结直肠癌发生发展和淋巴结转移之间的关系。(2)通过限制性内切酶片段长度多态性技术(Restriction FragmentLength Polymorphism,RFLP)检测VEGFA、APP及NUMB mRNA选择性剪接单体的表达情况,进一步分析上述基因的选择性剪接单体与结直肠癌的关系。(3)针对VEGFA选择性剪接单体VEGFA165b的表达情况,探讨其在结直肠癌发生发展中的作用。结果:(1)Real-time qRT-PCR检测显示APP及NUMB mRNA在结直肠癌组织中明显低表达,而VEGFA呈高表达,统计学具有显著性差异(P<0.05)。三者表达与肿瘤浸润深度、有无淋巴结转移以及TNM分期无关。(2)RFLP检测显示VEGFA的选择性剪接单体VEGFA165a/b在结直肠癌组织中的表达水平明显高于正常黏膜组织,统计学具有显著性差异(P <0.05),VEGFA121a/b和VEGFA206a/b在两种组织的表达水平无明显差别;APP的选择性剪接单体APP695、APP751和APP770在结直肠癌组织中与正常黏膜组织的表达水平无明显差别(P>0.05);NUMB的选择性剪接单体NUMB-PRRS在结直肠癌组织中呈低表达,而NUMB-PRRL呈高表达,两者均具有显著性差异(P <0.05)。(3)VEGFA165b在结直肠癌组织中的表达水平明显低于正常黏膜组织,统计具有显著性差异(P <0.01);其表达与肿瘤浸润深度、有无淋巴结转移以及TNM分期无关。结论:(1)VEGFAmRNA及其选择性剪接单体VEGFA165a/b在结直肠癌组织中的表达水平明显高于正常黏膜组织,提示VEGFA在整体水平上具有促进结直肠癌的发生发展的作用,而VEGFA165a/b可能在其中发挥重要作用。(2)APP mRNA在结直肠癌组织中的表达水平明显低于正常黏膜组织,提示APP一定程度上抑制结直肠癌的发生发展。(3)NUMB mRNA及其选择性剪接单体NUMB-PRRS在结直肠癌组织中的表达水平明显低于正常黏膜组织,而另一选择性剪接单体NUMB-PRRL在结直肠癌组织中的表达水平明显高于正常黏膜组织。提示NUMB-PRRS对于结直肠癌的抑制作用可能强于NUMB-PRRL的促进作用,从而使得NUMB在整体水平上抑制结直肠癌的发生发展。(4)VEGFA165b在结直肠癌组织中的表达水平明显低于正常黏膜组织,提示VEGFA165b可能具有抗血管生成和抑制结直肠癌发生发展的作用,VEGFA165a的作用可能与之相反。
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