广东地方名优柑桔品种组培再生体系的建立及转基因研究

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  柑桔是世界上最重要的水果之一,也是我国主产水果和重要的进出口水果之一。近年来黄龙病也始终是威胁柑桔生产的主要病害之一。培育抗病新种质是解决黄龙病危害的根本途径。植物转基因技术提供了另一条育种途径,有望从根本上解决这一问题。   柞蚕抗菌肽具有广谱杀菌功能,对柑桔黄龙病病原类细菌及溃疡病病原菌黄单胞菌具有很强的抑菌效应。本研究试图应用PSP韧皮部特异启动子驱动利用柑桔偏好密码子编码改造的抗菌肽D基因在柑桔上进行遗传转化,提高外源基因的表达效率。本研究也试图利用GFP基因在植物体内的表达验证PSP韧皮部特异启动子的组织特异性。   本论文以建立广东名优柑桔品种再生体系为基础,构建几个适用的植物表达载体转化农杆菌,并在此基础上进行柑桔遗传转化体系建立为研究目的。基于转化体系建立所需要的高效再生体系,本研究首先针对四会甜桔、沙糖桔、桠柑、贡柑以及暗柳橙的不同外植体进行离体再生研究,以期得到不同品种的较适合的培养基配方。构建了以PSP韧皮部特异启动子驱动GFP报告基因的pCAMBIA1302植物表达载体。   以含新构建植物表达载体的农杆菌菌株EHA105、GV3101分别浸染5个柑桔品种的黄化组培实生苗的上胚轴,在预培养、浸染、共培养之后,采用不同的筛选分化方式,确立了使用仅添加头孢霉素抑制农杆菌生长的培养基。
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