晋中地区鸡致病性大肠杆菌分离与鉴定

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致病性大肠杆菌是引起禽大肠杆菌病的主要病原。由于其具有复杂的抗原性、众多的血清型,临床上可引起急性败血症以及气囊、心包、输卵管、腹膜、关节、肠、脑、眼等组织的炎症。随着养禽业发展速度越来越快,禽大肠杆菌病变得越来越严重且复杂。目前该病在我国感染率可达到5%~30%,病死率高达90%。本试验对山西省晋中地区一些养殖场送检30只病死鸡进行剖检,从肝脏中分离菌株后在麦康凯和营养琼脂培养基上培养进行形态学观察,将纯化后的分离菌进行生化鉴定(糖类发酵、硫化氢、甲基红(MR)、吲哚(靛基质)及脲酶试验)以及提取分离菌株基因组DNA,并用16SrDNA通用引物进行PCR扩增、测序并与GenBank中的E.coli 16S rDNA序列进行比对检测其同源性、构建进化树进行遗传进化分析以及其血清型、耐药性、致病性均进行了研究。本试验结果表明:1.分离菌株进行纯化培养、革兰染色及生化反应后,有8株分离菌符合大肠杆菌的特征。2.扩增8株分离菌的16S rDNA基因序列后,与GenBank中大肠杆菌参考株的16S rDNA基因序列进行比对,同源性均达到99%。同时用16SrDNA基因序列构建遗传进化树,结果显示JX2、JX3与PY7、PY8分别被划为一支,说明两两菌株间同源性较高,四个菌株间亲缘关系也较近。JX6和PY1与JX2、JX3的亲缘关系均较远,说明JX6和PY1菌株可能发生了变异。分离菌株JX5虽处于一个独立的分支上,但其与JX4亲缘关系相对较近。3.对8株分离菌进行血清型鉴定,结果分别是:PY1:078、JX2:078、JX4:02、JX6:02、PY7:078、PY8:○11,JX3是自凝菌株,JX5未鉴定出。4.分离的菌株对头孢噻肟钠、阿奇霉素、卡那霉素、庆大霉素的敏感性较高,其次为头孢拉啶和喹诺酮类药物。但分离的菌株均呈现多重耐药性,其中最少的为4耐,最多的为13耐,5耐及5耐以上的菌株占分离菌株的87.5%,分离菌中未出现中介菌株。其中喹诺酮类药物药物的耐药率达到了 75%,阿莫西林、强力霉素、利福平耐药率达到100%。5.将8株分离菌的菌液以原液、10倍稀释、100倍稀释的梯度肌肉注射到10日龄的雏鸡体内进行动物致病性试验,确定PY1、PY7、PY8分离株为高致病力菌株,JX2、JX3分离株为中致病力菌株,JX4、JX5、JX6分离株为低致病力菌株。本试验确定出晋中一些地区致病性大肠杆菌的优势血清型及敏感药物,为进一步研究晋中地区致病性大肠杆菌病和建立实用有效的防治措施奠定了一定基础。
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