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肿瘤坏死因子样配体1A(tumor necrosis factor ligand-related molecule-1A,TL1A),属于肿瘤坏死因子超家族成员15(tumor necrosis factor superfamily member15,TNFSF15),它与肿瘤坏死因子受体超家族成员死亡受体3(death receptor3,DR3)结合,通过对T淋巴细胞的作用影响机体的免疫应答,还具有抑制肿瘤生长的作用,同时还能激活NF-kB与胱天蛋白酶(caspase)诱导相关细胞凋亡。在炎症发生发展过程中,炎症细胞的TL1A表达水平显著提高。TL1A可促进炎性细胞因子的合成和分泌,增强宿主对外源移植物的排异反应,在炎性疾病的发生发展中起到重要作用。目前还未见对硬骨鱼类肿瘤坏死因子样配体1A及其受体DR3的克隆鉴定研究,本研究以斑马鱼为研究对象,利用分子生物学、生物信息学等相关手段,从斑马鱼基因组中筛选获得具有TNF结构域的分子TL1A及具有TNFR结构域(TNFR domain)和死亡结构域(death domain)的TL1A的受体DR3,对它们进行克隆鉴定、表达模式分析、病原刺激等研究。 斑马鱼TL1A基因cDNA全长为1709bp,开放阅读框(ORF)长702bp,编码233个氨基酸;预测的蛋白分子量和等电点(PI)分别为27.22kDa和6.32;其氨基端具有一个跨膜结构,羧基端为TNF结构域。系统进化树显示斑马鱼TL1A与硬骨鱼类TNF分子有较高同源性,在进化树中聚类为一支,而与哺乳动物、鸡等的TL1A的同源性低。TL1A mRNA在鳃、头肾、脾脏、皮肤等所有被检测的组织中呈组成型分布,在肌肉、皮肤中表达量较高。斑马鱼脾脏和头肾组织中TL1A mRNA的表达量在嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)刺激后6小时显著增加。 斑马鱼DR3基因cDNA全长为1602bp,开放阅读框(ORF)长1122bp,编码373个氨基酸;预测的蛋白分子量和等电点(PI)分别为42.33kDa和8.18;其氨基端具有TNFR结构域和死亡结构域。DR3mRNA在鳃、头肾、脾脏、皮肤等所有被检测的组织中呈组成型分布,在鳃、小肠、皮肤和头肾中表达量较高。斑马鱼脾脏和头肾组织中DR3mRNA表达量在人工感染嗜水气单胞菌(A.hydrophila)刺激后第6小时呈显著增加。 研究结果表明,斑马鱼的肿瘤坏死因子样配体1A(TL1A)及其受体DR3能响应嗜水气单胞菌处理引起的免疫应答,研究结果为深入研究硬骨鱼类肿瘤坏死因子超家族成员的结构与功能奠定重要基础。 JAK酪氨酸蛋白激酶-信号传导和转录激活因子(Janus kinase-signal transducers and activators of transcription,JAK-STAT)信号通路是动物机体内普遍存在的的重要细胞信号通路之一,在脊椎动物中,其主要参与到调控多种细胞因子的表达和分泌。细胞因子信号转导抑制因子(Suppressor of cytokine siganaling,SOCS)家族是重要的JAK-STAT途径抑制蛋白,细胞因子诱导SH2蛋白(cytokine inducible SH-2containing protein,CISH)是目前已知的8个SOCS的家族成员之一,对包括白细胞介素2(interleukin-2)在内的细胞因子具有调控作用。本研究克隆得到长度为1685bp的鲤(Cyprinus carpio)CISH的cDNA全长,其中开放阅读框(ORF)长666bp,编码221个氨基酸,推导的蛋白质分子量为24.91kDa。CISH具有典型的SOCS家族结构特征,其功能域包括N区、中央SH2结构域和C端SOCS box结构域,它们同样保守地存在于其他硬骨鱼类的CISH蛋白中。系统进化分析表明,鲤鱼CISH与同属鲤科的草鱼和斑马鱼的亲缘关系最近。组织分布结果表明,CISH在鲤鱼血液中的mRNA表达水平最高,在肝脏中的表达量最低。嗜水气单胞菌(A.hydrophila)刺激后,CISH在血液中表达量在24h后出现显著上升,并在48h后恢复正常水平,暗示CISH可能在鲤鱼免疫应答过程中起重要作用。