为进一步研究犬瘟热病毒的防控与诊断,本研究采用分子生物学技术,分别设计合成了扩增CDV H基因、F基因和N基因的三对引物。采用RT-PCR分别扩增了狐源CDV泰安株(CDV-FOX-TA)的H基因、F基因和N基因,并将其分别克隆进pMD18-T载体,进行序列测定与分析。此外本研究还设计合成了一对特异性引物与TaqMan探针,对反应体系与条件进行优化,建立一种TaqMan荧光定量RT-PCR检测CDV的方法,试验结果表明:1.CDV-FOX-TA H基因含有1个ORF,全长1824bp,共编码607个氨基酸,与CDV-A75/17株和部分野毒株编码的氨基酸数量相同,与CDV- Onderstpoort编码的604个氨基酸不同。CDV-FOX-TA H基因终止密码子不是AUU而是UGA。其上存在8个潜在的天冬酰氨糖基化位点,与野毒株和疫苗株均不同,与CDV-Onderstpoort、CDV-Convac、CDV-A75/17、CDV-LP的同源性分别为89.2%、90.6%、98.6%和98.7%。2.CDV-FOX-TA的F基因含有1个ORF,全长1889bp,共编码662个氨基酸。有4个翻译起始密码子,其中3个位于阅读框内,1个位于阅读框外, CDV-FOX-TA F基因翻译起始密码子不是第1个或第2框内ATG,因其461-463位置不是ATG而是AUA,而是可能利用与CDV-A75/17相同的第二个起始密码子,因为CDV-FOX-TA这一区域的核苷酸与CDV-A75/17是完全保守的。CDV各毒株的F基因存在较大的差异,信号肽区域变异很大,但是F0蛋白裂解点(RRQRR)、13个半胱氨酸残基、4个潜在的天冬氨酰糖基化位点和2个疏水区都高度保守。3.CDV-FOX-TA N基因含有1个ORF,全长1572bp,共编码523个氨基酸,编码的氨基酸序列可以分为三个区:N端可变区、C端可变区和中间高度保守区。CDV-FOX-TA N基因与CDV-Onderstepoort、CDV-Convac的N基因的同源性分别为96.0%和95.9%,与野毒的同源性介于98.4%-98.9%之间。CDV-FOX-TA与弱毒的差异主要表现在C端和N端,中间区域高度保守。4.建立的CDV TaqMan荧光定量RT-PCR检测方法,具有高度特异性、敏感性、良好的可重复性和稳定性、而且简便、快速。