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一.研究背景及目的子宫内膜异位症(简称内异症)是妇科常见疾病,大约影响10-15%的生育年龄女性,造成一系列盆腔症状,比如月经紊乱、慢性盆腔痛、性交痛及不孕等。子宫内膜异位症是损害年轻女性生育功能和社会功能的主要原因之一,早期诊断可以提高治疗效果,尽早恢复内异症病人的正常生活。目前诊断的金标准是腹腔镜手术。由于缺少有效的早期诊断手段,内异症常被漏诊,或者诊断延迟。因此急切需要兼具高特异性和敏感性的无创性子宫内膜异位症诊断标志物。尽管有大量关于内异症生物标志物的研究,但没有一个单独标志物或一组标志物有足够的特异性和敏感性可以用于内异症无创性诊断实验。对于内异症标志物的研究主要集中于子宫内膜和血清,只有11%的子宫内膜异位症标志物的研究与尿液有关。蛋白质组学定量技术是疾病标志物筛选的常用技术之一,能够对临床样品中差异变化蛋白质进行高通量筛选和后期验证。串联质量标签(TMT)和平行反应监测(PRM)分别是非靶向和靶向定量蛋白质组学的代表技术。本课题采用TMT-PRM技术筛查策略,对卵巢内异症症的尿液标本进行全面的蛋白质组学分析,通过与正常人、卵巢良性肿瘤、卵巢恶性肿瘤对比,来寻找兼具高特异性和敏感性的生物标志物,进一步探讨内异症的发病机制。二.研究方法本研究共纳入97例病人,根据诊断分为四组:卵巢内异症组(U组,n=25)、卵巢良性肿瘤组(B组,n=25)、卵巢恶性肿瘤组(C组,n=22)和正常对照组(A组,n=25)。首先在每组中随机抽取5例采用基于TMT标记的高通量蛋白质组相对定量方法进行差异蛋白筛选,并对筛选出的差异蛋白进行生物信息学分析。使用PRM技术在剩余标本中进行目标蛋白的靶向验证。对验证出的特异性蛋白构建ROC曲线,寻找诊断效率最高的标志物组。三.研究结果以正常组为对照,四组样本使用TMT标记技术共筛选出差异蛋白242个,其中良性肿瘤组37个,恶性肿瘤组142个,内异症组127个。筛选出的差异蛋白中,内异症组特异性蛋白81个,恶性肿瘤组组特异蛋白96个,良性肿瘤组特异性蛋白14个,三组共有蛋白13个。生物信息学分析结果显示内异症组在经典通路中高迁移族蛋白B1(HMGB1)通路、CD40通路、Lymphotoxin β Receptor通路明显正向激活。PRM共验证出190个肽与TMT结果一致,对应105个蛋白。其中内异症特异性多肽32个,其中29个上调,3个下调,对应25个蛋白。18个多肽(16个蛋白)的AUC大于0.75。单个标志物中,组蛋白4的诊断效率最高(AUC=0.848),敏感性70%,特异性80%。四个功能相关蛋白组合H4、RPN1、ARF3、MYH10组合的AUC为0.863。四.研究结论本研究中我们首次将TMT-PRM技术用于子宫内膜异位症的研究。研究结果提示慢性炎症可能在内异症的发生发展中起重要作用。组蛋白4可能是内异症潜在的诊断或治疗靶点,这也是第一次在子宫内膜异位症体液标本中发现组蛋白水平升高。标志物组合H4、ARF3、MYH10和RPN1具有诊断效率最高。本研究为内异症的早期诊断和机制研究提供了新的思路,未来需要扩大样本量来验证本研究结论。