【摘 要】
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该研究报道了两株ESAT-6重组卡介苗的构建及其毒力、免疫原性和免疫保护性检测.首先将esat-6基因克隆入大肠杆菌-卡介苗穿梭载体pMV261中,得到重组质粒pME-1和pSME（后者的esat
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该研究报道了两株ESAT-6重组卡介苗的构建及其毒力、免疫原性和免疫保护性检测.首先将esat-6基因克隆入大肠杆菌-卡介苗穿梭载体pMV261中,得到重组质粒pME-1和pSME（后者的esat-6基因前加上一段BCG α-Ag信号肽序列）,用电穿孔法将重组质粒转入卡介苗中,分别获得相应的重组卡介苗rBCG-1和rBCG-2,并通过PCR和打点杂交进行了鉴定.Tricine-SDS-PAGE和免疫印迹证实这两株重组卡介苗经热诱导后分别能融合表达或分泌表达ESAT-6.为研究重组卡介苗的毒力,我们将rBCG-1和rBCG-2分别皮下接种BALB/c小鼠（10<6>CFU）.接着我们又检测了重组卡介苗的免疫原性.最后我们对重组卡介苗的免疫保护性进行了研究,并与卡介苗相比较.此外,我们还利用高效原核表达载体pGEX1-λT构建了ESAT-6重组质粒pGME,经IPTG诱导后能在大肠杆菌中表达32kDa的GST融合蛋白.重组ESAT-6将来可用于发展结核病特异诊断试剂或亚单位疫苗.该研究构建了能够表达卡介苗基因组中缺失的保护性抗原基因的重组卡介苗,并系统地研究其毒力及免疫效应.
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