论文部分内容阅读
一、背景与目的肝门部胆管癌（HC，Hilar Cholangiocarcinoma）是肝胆外科治疗的难题之一，且患病率有逐年升高的趋势。患者大多数伴有严重的梗阻性黄疸（梗黄，Obstructive jaundice，OJ），梗黄患者感染、发热、败血症和营养不良等术后并发症较多，患者大部分肝切除术后极易出现肝功能衰竭而导致死亡。研究表明，对梗黄患者行术前胆道引流是十分必要的。我们前期的研究证实外引流对梗阻性黄疸大鼠部分肝切除术后残肝再生较内引流有明显抑制作用，其中原因及机制尚不清楚。而内外引流的主要差别就在于胆汁是否能够进入肠道。因此，胆汁酸的作用可能是不同引流方式部分肝切除后肝再生差异的主要原因之一。胆汁酸是胆汁中一类胆烷酸的总称，有调节胆酸代谢、能量代谢以及抑制肠道细菌过度增殖等作用。是否胆汁酸通过影响肝细胞凋亡从而影响肝再生？本实验通过比较外源性胆汁酸干预的不同引流方式下梗黄大鼠部分肝切后肝功能、肝再生率、有丝分裂指数、血总胆红素浓度、血浆胆汁酸水平、肝细胞凋亡指数和Bax及Bcl-2表达的差异，进一步探讨胆汁酸干预的不同引流方式下肝细胞凋亡及再生差异的机制。二、材料与方法采用成年雄性SD大鼠50只，随机分成五组，即梗阻性黄疽组(OJ,n=10)、胆汁内引流组(ID，n=10)，胆汁外引流组(ED, n=10)，胆汁酸外引流+0.2%CA组（ED+CA，n=10）和假手术组(SH, n=10)。采用胆总管双重结扎剪断的方法制作大鼠梗阻性黄疸动物模型，梗阻7天后分组行不同方式胆道引流，胆汁酸外引流+0.2%CA组予外源性胆汁酸灌胃，引流7天后行70%部分肝切除术，建立梗阻性黄疸不同引流方式减黄70％部分肝切除SD大鼠动物模型。并在术后72h收集大鼠血液及肝脏组织标本。生化分析仪检测肝功能，测定肝再生率，免疫组化法观察肝脏组织PCNA表达、有丝分裂指数，ELISA试剂盒检测总胆汁酸水平，TUNEL法测定肝细胞凋亡指数，免疫组化法观察肝脏Bax及Bcl-2表达。三、结果（1）PH术后ID组及ED+CA组死亡率和SH组相当，较ED组、OJ组明显偏低。（2）PH后72h肝再生率、PCNA、有丝分裂指数，ID组高于ED组(P<0.05)，ED组又高于OJ组(P<0.05)，ID组和ED+CA组及SH组差异无统计学意义(P>0.05)。（3）OJ组胆汁酸水平明显高于其他各组(P<0.01)，PH后72小时OJ组胆汁酸水平最高，ID组高于ED组(P<0.05)，ID组和ED+CA组及SH组差异无统计学意义(P>0.05)。（4）OJ组大鼠凋亡细胞明显增加，SH组仅见少量细胞凋亡，ID组、ED+CA组、ED组凋亡指数依次上升，OJ组、ID组、ED组、SH组凋亡指数互相比较均有统计学差异（P＜0.05）。ID组与ED+CA组则无统计学差异。（5）OJ组和ED组Bax表达量明显增加，且ED组的表达量低于OJ组，（P＜0.05），OJ组、ID组、ED组、SH组互相比较均有统计学差异（P＜0.05）。Bax表达与凋亡指数一致。ID组及ED+CA组Bcl-2表达增加，与SH组比较有统计学差异（P＜0.05）。ID组与ED+CA组则无统计学差异。四、结论1内外引流术均可解除胆道梗阻，但更符合生理的内引流PH术后肝再生明显优于外引流和未引流，外引流术对肝再生有明显的抑制。2外引流术相对内引流术后导致的肝再生差异可能是由于胆汁酸肠肝循环破坏，使肝细胞凋亡增加，进而影响了肝再生。3外引流加外源性胆汁酸干预可以达到与内引流基本相同的效果，为临床治疗提供了新的方向。