养殖场中季铵盐抗性菌株Ⅰ类整合子特性的研究

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目的:检测食源性环境——养殖场分离的细菌的抗药性、相关抗性基因的定性、抗性基因的定位及耐药性的转移,为耐药性产生的基因机制提供一定的科学基础,为控制细菌耐药性的产生和传播提供一定的科学依据。   方法:对养殖场分离的抗性菌株,采用生化常规鉴定方法对其进行鉴定;采用K—B法检测其对常用十种抗生素的药敏性:然后采用PCR(polymerase chain reaction)基因扩增实验,以intI1-F/B、InF/B、ProF/B及DE-F/B为引物对其Ⅰ类整合子、耐药基因盒及耐药基因盒表达所需的启动子进行检测,并对耐药基因盒、启动子扩增产物进行分析;最后通过质粒接合转移实验来对Ⅰ类整合子基因进行定位及检测耐药基因的水平转移。   结果:实验共分离鉴定16株菌,全部属于肠杆菌科。经药敏实验得知,16株菌全部至少对3种抗生素产生耐药。其中,耐磺胺类药物的比例最大。Ⅰ类整合子基因检测全部为阳性,检出率为100%。对其基因盒进行扩增,只有11株检测出耐药基因盒。其中,4株菌得到1803bp的片段,3株菌得到1570bp的片段,2株菌得到419bp的片段,2株菌得到155bp的片段。经序列分析显示多对甲氧苄啶、氨基糖苷类抗生素耐药。对启动子进行分析,共得到两种类型:弱启动子和杂合1启动子,且全部属于P1启动子。接合转移实验中,有3株菌接合转移成功,表明这3株菌的Ⅰ类整合子基因位于质粒上,而且耐药基因是可以转移的。   结论:实验中的菌株均来自养殖场,其对常用抗生素的耐药率较高。而且第一类整合子检测的阳性率为100%,表明这些菌株面临着相对较高的抗生素选择压力。另外,一些耐药基因位于质粒上,可以在不同的种属间传播。因此,耐药菌通过食物链进行传播,为传染病的暴发及流行提供了可能性。环境中整合子阳性菌株的出现,对我们合理使用抗生素和积极监测细菌耐药性提出了更高的要求。
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