目前，针对骨肉瘤的治疗方法主要采用联合化疗、手术治疗，同时辅助放疗、生物学治疗等，但都存在一定不足之处：如手术治疗仅局限原发肿瘤灶的切除，对于肿瘤转移灶则无能为力，需配合有效的全身治疗；化疗能进行全身治疗，但所用药物的剂量达到杀灭肿瘤细胞的同时，也会对正常细胞和组织产生杀伤作用；此外全身治疗时易产生多药耐药现象。总之，增加抗肿瘤药物对骨肉瘤的特异性，减少对正常组织和细胞的毒副作用，是骨肉瘤治疗中亟待解决的一个课题。导向治疗具有此优点，既增强药物的特异性，提高疗效，同时又减少对正常组织和细胞的损伤，其关键在于具备高效导向性的载体系统。传统的导向治疗是以单克隆抗体为导向载体，自Embleton等首先制备出抗骨肉瘤的单克隆抗体，随后多篇文献报道了抗骨肉瘤的单克隆抗体用于导向治疗的研究，国内纪方等也观察到⁹⁰Y-标记的抗人成骨肉瘤单克隆抗体对人骨肉瘤裸鼠移植模型具有导向杀伤肿瘤效应。但作为载体，单克隆抗体存在无法克服的缺陷，如其分子较大，在组织中穿透性较差，若为鼠源性单抗则易在体内诱发人抗鼠抗体（HAMA）。而利用特异性结合肿瘤细胞的小分子则能解决这个问题，它分子量小，组织穿透性好，对人体的抗原性弱，不易诱发机体对其产生排斥反应，并能改善所交联药物的传递系统，提高药物导向的特异性，从而实现治疗的针对性和安全性。噬菌体展示技术为筛选开发小分子活性物质提供了的重要的技术支持。本研究以骨肉瘤细胞为靶筛选噬菌体12肽库，以寻求能与骨肉瘤细胞特异结合的小分子短肽，为骨肉瘤的靶向治疗提供有用的信息。本研究还以能与骨肉瘤细胞特异结合的噬菌体克隆为靶筛选噬菌体环7肽库，以期得到骨肉瘤细胞表面位点的模拟序列，对骨肉瘤细胞表面相关抗原的模拟结构进行了初步的探索。本研究包括以下两个方面： 1、骨肉瘤细胞特异结合肽的研究：朱国鸿:介肉瘤细胞特异结合欣及肺病杭原棋拟位的研究 首先以骨肉瘤细胞为靶子，对噬菌体随机12肤库进行筛选，采用差减筛选（subtraetion sereening）的方法，用成骨细胞作为吸附细胞（absorber eell）以除去非特异结合的噬菌体，以期得到可与骨肉瘤细胞特异结合的小分子短肤。经过三轮筛选后，随机挑选20个噬菌体克隆对其进行鉴定。我们用细胞EUSA和细胞免疫组化两种方法鉴定筛选出的噬菌体克隆。然后将阳性克隆进行测序，推导其氨基酸序列。利用细胞ELIsA的方法鉴定，其中有9个克隆显示可与骨肉瘤细胞有较强的结合。用细胞免疫组化对结合能力最高的NO.14噬菌体克隆再进一步鉴定，结果显示与骨肉瘤细胞有良好的结合特性，而与成骨细胞、HEK293（人胚肾细胞）、THP一1（人单核细胞系）、MCF一7（人乳腺癌细胞）、CNE3（鼻咽癌细胞NPC eell lines）无明显结合。DNA测序结果推导氨基酸序列，结果发现它们之间无明显相似性。据此推测骨肉瘤细胞表面成分相当复杂，具有不同的表位。本研究成功地利用噬菌体表面呈现技术筛选出骨肉瘤细胞特异性结合短肤，为骨肉瘤的靶向治疗的进一步研究奠定基础。2、骨肉瘤细胞表面相关抗原模拟肤的初步筛选: 为获得骨肉瘤细胞表面分子模拟肤，本研究建立了生物素标一记噬菌体体系。我们用与骨肉瘤细胞特异结合的12肤No.14噬菌体克隆为靶分子筛选噬菌体环7肤库，并且利用骨肉瘤细胞裂解液作为配基洗脱，经过三轮筛选后，挑取20个克隆用生物素一亲和素系统ELISA进行了鉴定。本研究采用特殊的筛选方式，即以噬菌体克隆为靶分子，直接对噬菌体肤库进行亲和性筛选，省略了肤合成或纯化蛋白步骤，更直接地对骨肉瘤细胞表面相关抗原模拟位进行了初步的研究。