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目的:本研究采用海马齿状核(dentate gyrus,DG)内β淀粉样蛋白(Amyloid β peptide,Aβ)注射的方法建立阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)小鼠模型,并通过行为学实验手段检测其认知功能以及开心颗粒的改善效果。应用组织学及分子生物学研究技术探究Aβ损害认知功能的病理生理学机制,及开心颗粒改善Aβ诱导小鼠记忆障碍的神经生物学机制。方法:将小鼠随机分为模型组、假损伤组及开心颗粒组3组。模型组和开心颗粒组小鼠通过双侧脑海马齿状核内注射Aβ1-42寡聚体制作AD模型;假损伤组小鼠注射等体积的生理盐水。开心颗粒组小鼠每只每天灌开心颗粒的生理盐水溶液(浓度为0.5g/ml)0.4ml,假损伤组与模型组小鼠灌等体积的生理盐水。通过Morris水迷宫对各组小鼠的学习记忆能力进行评价。行为学评价后取材,对各组4%多聚甲醛固定的小鼠脑组织进行尼氏小体染色,观察海马区神经元形态学改变,并应用TUNEL法对各组小鼠脑海马区凋亡的神经元进行标记。对于各组冻存的脑组织,一方面,通过Western-blot技术对各组小鼠脑海马区中 Bcl-2、Bax凋亡相关蛋白及MAPK家族蛋白ERK、p-ERK的含量进行测定;另一方面,通过酶联免疫法(ELISA)测定每组小鼠脑皮质区中ACh和AChE含量。结果:1小鼠行为学测试结果:(1)假损伤组与模型组相比:定位航行测试结果,在测试的第4、5天,假损伤组小鼠找到平台潜伏期的平均时间明显少于模型组,差异有统计学意义(P<0.01)。空间搜索测试结果,假损伤组小鼠穿越平台区次数和在第二象限航行时间百分比的平均值均大于模型组,差异有统计学意义(P<0.01)。(2)开心颗粒组与模型组相比:定位航行测试结果,在测试的第5天,开心颗粒组小鼠找到平台的潜伏期平均值明显小于模型组,经统计学检验P<0.01,差异有统计学意义。空间搜索测试结果,开心颗粒组小鼠穿越平台区次数和在第二象限航行时间百分比的平均值均大于模型组,差异有统计学意义P<0.01。2尼氏染色结果:(1)假损伤组小鼠海马DG区颗粒细胞内尼氏体丰富,核为清晰的蓝色,细胞整齐密集排列,细胞层数较多。(2)模型组小鼠海马DG区Aβ注射位点处颗粒细胞排列松散大量神经元消失,颗粒细胞层数明显减少或消失,残存的神经元胞核固缩。(3)开心颗粒组小鼠海马DG区Aβ注射位点处颗粒细胞排列松散部分神经元消失,颗粒细胞层数有所减少,部分残存的神经元胞核固缩,较模型组相比,Aβ对神经元的毒性作用明显减弱。3 小鼠脑海马区凋亡神经元TUNEL法标记结果:在模型组和开心颗粒组小鼠的脑海马齿状核区(Aβ1-42寡聚体注射位点)存在棕色颗粒,而假损伤组均未标记出凋亡神经元。并且,在棕色颗粒的数量上,模型组明显多于开心颗粒组,差异有统计学意义(P<0.0 1)。4 小鼠脑海马区凋亡关键蛋白Bcl-2和Bax检测结果:在模型组小鼠海马中Bax含量的平均值明显多于假损伤组,差异有统计学意义(P<0.01),而开心颗粒组小鼠海马中Bax含量明显小于模型组,差异有统计学意义(P<0.01)。三组间Bcl-2的含量测得结果经统计学检验无显著性差异(P>0.05)。各组间小鼠脑海马区Bcl-2与Bax的比值的比较中,模型组小于假损伤组(P<0.01)和开心颗粒组(P<0.05),差异均有统计学意义。5小鼠脑海马区p-ERK和ERK检测结果:模型组小鼠海马内p-ERK与ERK的含量比值小于假损伤组,有统计学差异(P<0.01),而开心颗粒组小鼠海马内p-ERK与ERK的含量比值大于模型组,有统计学差异(P<0.05)。6小鼠脑皮质区ACh和AChE的含量测定结果:小鼠脑皮质区中ACh的含量在模型组与假损伤组间并无明显差异,而开心颗粒组小鼠脑皮质区中的ACh含量高于模型组,差异有统计学意义(P<0.05)。小鼠脑皮质区中AChE的含量在模型组与假损伤组间并无明显差异,而开心颗粒组小鼠脑皮质区中的AChE含量低于模型组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:1通过对小鼠海马齿状核内Aβ 1-42寡聚体注射制作AD模型,能够模拟AD的行为学特点。2 开心颗粒能够改善Aβ1-2寡聚体诱导的AD模型小鼠认知功能障碍,提高AD小鼠学习记忆能力。3 开心颗粒可抑制Aβ1-42寡聚体诱导的海马神经元凋亡。4 开心颗粒可通过抑制Bax的表达上调Bcl-2与Bax的比值阻止Aβ对神经元凋亡的诱导。5 开心颗粒通过促进ERK的磷酸化,激活ERK信号传导途径,保护神经元对抗Aβ的毒性作用。6 开心颗粒能够抑制AD模型小鼠脑内AChE的活性,提高脑内ACh含量,改善AD模型小鼠学习记忆能力。